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广佛手水溶性化学成分研究 |
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黄 玲
提要 对广佛手的水溶性多糖成分进行提取、分离和纯化，并进行鉴定和分子量测定，为该药的开发利用提供依据。
关健词 广佛手； 多糖； 提取； 鉴定； 分子量测定
广佛手，为芸香科柑橘属植物［Citrus medica L.var sarcodactylis (Noot) Swingle］的成熟果实。本品栽培于广东、广西、福建、云南、四川、浙江，安徽等地。秋季果实呈浅绿色或稍带黄色时采收。性味辛苦酸、温，入肝、胃经，中医认为其有理气和中、化痰止咳的功效。临床用于缓解胃腹胀痛和咳嗽气喘等症状［1］。有关的化学成分，文献报道有柠檬油素、香叶木甙、橙皮甙和黄酮［2］。传统中药主要以水煎剂入药，水溶性成分可能是药物的有效成分之一，未见有关研究报道。本实验对广佛手水溶性多糖成分进行研究。
1 仪器与材料
UV-210A紫外分光光谱仪(日本岛津公司)；LxJ-Ⅱ型离心沉淀机(上海医用分析仪器厂)；葡聚糖凝胶(SephadexG-200)、葡聚糖(Dextran)系列标准品(均为瑞典Pharmacia厂出品)；样品购于有关药材公司；本试验所用试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 多糖的提取、分离和纯化：广佛手干药材2 kg，用冷开水浸泡3次，合并提取液，水浴蒸发浓缩至小体积成浆。浓缩浆用适量蒸馏水溶解，加95%乙醇至溶液含醇量为80%，边加边搅拌，静置过夜，离心(3 500 rpm，10 min)，弃去上清液，沉淀物水浴加热除乙醇，然后加水溶解并过滤，滤液逆向水流透析24 h。取出后浓缩至少量体积，加3倍量95%乙醇沉淀，搅拌，静置过夜，离心(4 800 rpm，15 min)。沉淀物水浴除乙醇并干燥，得棕黑色沉淀，即为佛手多糖粗品。
取Sephadex G-200干胶20 g，加水600 ml浸泡3 d溶胀，减压脱气后装柱(32.2 cm×3.5 cm)，用蒸馏水以恒定流速平衡柱48 h。称取多糖粗品4 g，加40 ml蒸馏水溶解，过滤，滤液减压脱气，上柱。用蒸馏水洗脱，平均4 ml接一流分。用硫酸－苯酚比色法［3］，测定多糖的相对浓度，合并单一对称峰的组分，得4个不同分子量的均一多糖。合并后分别逆向水流透析48 h，浓缩至小体积，加入3倍量95%乙醇，离心后沉淀物干燥备用。
2.2 组成单糖的鉴定方法
纸层析：第1个组分Fs-I含量很少，所以未进行单糖测定。取多糖Fs-Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各5 mg，加1M H2SO4 5 ml封管反应，100℃水浴6 h。取出反应液加BaCO3中和至 pH=7，抽滤除沉淀。滤液浓缩点样，取中速新华层析滤纸(30 cm×7 cm)上行法展开15 h。展开剂为：正丁醇∶乙酸∶水(4∶1∶5)［4］，苯胺－邻苯二甲酸显色［5］。结果见图1。
2.3 分子量测定：采用凝胶过滤法［4］。用0.5 M NaCl平衡Sephadex G-200柱48 h，用已知分子量的 Dextran T10、T70、T500分别相继上柱，上柱量为1 mg，流出液每管2ml分部收集，用硫酸－苯酚比色法分别求得洗脱体积 Ve，再用T2000 1 mg上柱，求得柱空体积 Vo，按 Ve/ Vo与分子量对数关系作回归曲线。最后将3种多糖(Fs-Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ)按上述条件分别上柱，求得 Ve，根据 Ve/ Vo，代入回归曲线，求得3种多糖的平均分子量。结果见表1。
表1 3种多糖的平均分子量
组别 M lg M Ve(ml) Ve/ Vo
T2000 2000000 6.3010 19.6( Vo) 1
T500 500000 5.6990 43.7 2.2296
T70 72200 4.8585 61.4 3.1327
T10 9900 3.9956 80.7 4.1173
Fs-Ⅲ 6841757 10.6 0.5408
Fs-Ⅳ 4945048 14.1 0.7194
Fs-Ⅴ 2106683 23 1.1888
3 讨论
3.1 本实验原理是用水提取水溶性成分，再用80%乙醇及透析除去单糖、低聚糖、色素、蛋白质(少量)等干扰性成分，即得多糖粗品。
3.2 根据多糖分子量大小不同，上Sephadex G-200柱，分离出4种不同分子量的多糖，通过[1] [2] 下一页
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