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阿胶的凝胶电泳鉴别 |
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李峰 张振秋 韩家珩 裴桂秋 杨文菊 朱民田
提要 采用两种常用的连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳法 ，对不同厂家生产的阿胶及两种伪品杂皮胶进行了鉴别研究，为阿胶的鉴别提供了新的方法 。
关键词 阿胶； PAGE； SDS－PAGE
Gel Electrophoresis Distinguishing of Ass-hide Glue
Li Feng, Zhang Zhenqiu, Han Jiaheng, et al
Liaoning College of Traditional Chinese Medicine, Shenyang 110032
Abstracts The continuous PAGE and SDS-PAGE were used to distinguish ass-hide glue different pharmaceutical factories and two fakes. A new method of distinguishing for Ass-hide glue is provided.
Key words Ass-hide glue; PAGE; SDS-PAGE
阿胶，始载于《神农本草经》列为上品，因出山东东阿，故名阿胶。阿胶“以乌驴皮得阿井 之水煎成为佳”［1］ 。因此正品阿胶应为驴皮胶，而以其它动物皮熬制的胶均视 为伪品［2］。但因各种杂皮胶的制备工艺与阿胶相似，故其外观性状相似；又因其 成分主要为大分子蛋白质，所以鉴别极其困难。为此，我们采用两种常用的连续系统聚丙烯 酰胺凝胶电泳法(简称PAGE和SDS－PAGE)，对两种阿胶及伪品杂皮胶进行了鉴别，结果发现 以SDS－PAGE法较为理想。
1 实验材料
阿胶Ⅰ(营口中药厂，批号891127)，阿胶Ⅱ(山东平阴阿胶厂，批号911223)，杂皮胶Ⅰ(山 东东阿阿胶厂，批号055935)，杂皮胶Ⅱ(辽宁省庄河药检所提供)。
2 实验方法
2.1 PAGE法
2.1.1 溶液的配制：参照文献［3］方法进 行，缓冲液采用Tris－甘氨酸ph8.3的缓冲液。
2.1.2 样品的制备：分别取样品各1g，粉碎，用电 极缓冲液熔化，使成浓度为10%的溶液，离心(3000r/min)15min，取上清液备用。
2.1.3 凝胶的制备：参照文献［3］方法进行 ，凝胶浓度为7.5%。
2.1.4 加样与电泳：分别取样品液各80μl，加于 凝胶表面，再分别加入指示剂和甘油各1滴，接通电源，电流为8mA/管，于室温下电泳。整 个过程维持电流不变，待指示剂电泳至距末端0.5cm处，停止电泳。
2.1.5 固定、染色及脱色：将电泳后的凝胶于固定 液中固定30min，浸于染色液中过夜，然后用水冲洗胶条表面，最后于脱色液中反复脱色直 至背景清晰为止。
2.1.6 结果与讨论：各样品经电泳后结果如图1。4个样品均未见明显的电泳谱带，仅呈现一系列泳动率极相近的区，这可能因为泳动率 Rf不仅受分子量大小的影响，而且主要还受其所带电荷控制，且胶类药材的 成分多为蛋白质分子，所带电荷性质及数目相近，故各样品间及每个样品各蛋白质分子的泳 动率差异甚小。因此连续系统PAGE法对这4种样品的鉴别无意义。
2.2 SDS－PAGE法
2.2.1 溶液的配制：照文献方法［4］进行。
2.2.2 样品的制备：分别取上述样品各1g，粉碎， 加水2ml于水浴加热熔化，离心(3000r/min)15 min。取上清液用样品水解液以1∶3比例 稀释，混匀，至冰箱中水解过夜，备用。
2.2.3 凝胶的制备：参照文献［4］方法进 行，凝胶浓度为7%。
2.2.4 加样与电泳：同PAGE法中操作。
2.2.5 固定、染色及脱色：同PAGE法中操作。
2.2.6 结果与讨论：根据各样品泳动距离，形态及 着色程度绘制其电泳图谱如图2，以完全涂黑、斜线、交叉线及点线4种符号分别代表凝胶上 的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级谱带，并按泳动率计算公式 Rf=谱带移动距离/指 示剂移动距离。计算出各谱带的泳动率 Rf值，并列入表1。
表1 阿胶及杂皮胶电泳谱带数目、分布及主要谱带泳动率
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