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诱导性一氧化氮合酶抑制药对内毒素处理鼠主动脉和肺动脉的影响 |
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试剂 去甲肾上腺素(NE，Fluka Chemie AG，瑞士，1克/支，纯度99%)，乙酰胆碱(Ach，上海试剂公司进口分装，1克/支，纯度99%)，L-NAME(Sigma，5克/瓶，纯度99%)、AG(Sigma，50克/瓶，纯度99%)、内毒素(LPS，北京邦定公司，1毫克/支)。
实验方法 雄性Wistar大鼠(190～250g)，断头处死后速取主肺动脉及胸主动脉环悬挂于麦氏水浴管内，加入Krebs Buffer液10ml，通混合气体(95% O2，5% CO2)，调节温度37.0℃±0.5℃，给予静止肌张力1.0g(1g＝25mm)后检测血管内皮细胞的完整性，即用10－6mol／L NE使血管环收缩达最大且平衡后，加入10－5mol/L的Ach，若出现50%以上的舒张反应，为内皮细胞完整，将内皮细胞完整的血管环冲洗后加入累积剂量的NE(10－9～10－4mol/L)，测定量-效反应曲线，然后将主动脉和肺动脉环置含有LPS(300ng/ml)的组织培养液中，置37℃ CO2孵育箱中孵育4小时，测定量-效反应曲线。冲洗后随机分为L-NAME(300μ mol/L)孵育60及20分钟的主动脉(n＝8只)和肺动脉(n＝6只)或AG(100 μmol/L)孵育60及20分钟的主动脉(n＝8只)和肺动脉(n＝6只)共8组，分别在孵育60和20分钟后观察量-效反应曲线。
统计学处理 实验数据以平均值±s(mm/g)表示。组内行单因素方差分析和q检验。组间行团体t检验。P＜0.05有统计学差异。
结果
对NE的量-效反应曲线 给予LPS后所有动脉环对NE的反应性均降低；给予L-NAME或AG后，对高浓度NE的反应性均明显增加。以对10－6mol/L的NE的反应性比较，给LPS前主动脉较肺动脉的反应性稍高(P＞0.05)。给予L-NAME或AG后各组反应性均有升高，60分钟时L-NAME组主动脉较AG组稍高(P＞0.05)，而20分钟时明显高于AG组(P＜0.05)。肺动脉各时段较AG组明显升高(P＜0.05)。L-NAME组主动脉环和肺动脉环的升高幅度无明显差异；而60分钟组的反应性均略低于20分钟组(P＜0.05)。AG60分钟组主动脉升高的幅度明显大于肺动脉(P＜0.05)。而20分钟组两者无明显差异(P＞0.05)。说明L-NAME可使主动脉和肺动脉对NE的敏感性增高。AG仅使主动脉的敏感性增加(见图1～2)。
NE浓度〔-Log（mol／L）〕
图1 L-NAME处理60及20分钟主动脉和肺动脉对NE反应曲线
LB为给予LPS前反应值 LA为给予LPS后反应值
AL为给予L-NAME后反应值 x为AL与LA相比有统计学差异，P＜0.05
A：60分钟主动脉反应曲线 B：60分钟肺动脉反应曲线
C：20分钟主动脉反应曲线 D：20分钟肺动脉反应曲线
NE浓度〔-Log（mol／L）〕
图2 AG处理60及20分钟主动脉和肺动脉对NE反应曲线
LB为给予LPS前反应值 LA为给予LPS后反应值
AL为给予AG后反应值 x为AL与LA相比有统计学差异，P＜0.05
A：60分钟主动脉反应曲线 B：60分钟肺动脉反应曲线
C：20分钟主动脉反应曲线 D：20分钟肺动脉反应曲线
高峰时间和高峰值 从L-NAME或AG本身引起的收缩高峰时间看，L-NAME引起的血管收缩高峰较AG出现的早，AG组肺动脉收缩高峰早于主动脉(P＜0.05)。AG组主动脉收缩高峰值明显高于肺动脉，而L-NAME组两者无明显差异，L-NAME引起的肺动脉收缩高峰明显大于AG(P＜0.05)。见附表。
附表 L-NAME与AG所引起主动脉和肺动脉收缩高峰值和时间比较(±s)
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