-actin为对照，上游引物为：5′CTG TCT GGC GGC ACC ACC AT3′，下游引物为：5′GCA aCT AAG TCA TAG TCC GC3 ′，共254 bp。引物由北京生物制品研究所合成，反应体系为10×Buffer5 μl、25 mmol MgC I2 4 μl、dNTP 1 μl（各10 mmol/μl）、Taq酶0.3μl（5 U/μl）、逆转录的c DNA为模板2 μl、上下游引物各0.5 μl（50 pmmol/μl）、加水至50 μl。混匀、加入50 μl石蜡油覆盖液面，离心10 s。将反应管置于PCR仪内，先95 ℃7 min变性，再接95 ℃变 性1 min 30 s、54 ℃复性1 min、72 ℃延伸1 min 30 s，共35个循环后接72℃延伸10 min。反应终止后置－20 ℃保存。(3)PCR产物定量：PCR扩增结束后，β-catenin和β-actin各取10 μl样品于1.5％琼脂糖凝胶中电泳60 min，电压为5～7 V/cm，每毫升凝胶内含0.5μg的溴化已啶（EB），用电脑照胶仪分析各条带的灰度值，比较肿瘤与正常组织样品的β-环连蛋白与β-actin的比值，应用秩和检验方法对两组数据进行分析。
结 果
1．免疫组织化学：26例肾癌患者癌组织细胞浆内β-环连蛋白染色强阳性者9例，阳性16例，阴性1例，相应正常肾组织中阳性2例，其余均为阴性。β-环连蛋白在肾癌细胞内的表达主要集中在胞浆内,核内也有染色，肿瘤间质未见阳性染色。β-环连蛋白在肾癌中的表达较正常肾组织中的表达明显增加，差异有显著性意义（χ2=21.74，P＜0.01）。
在癌组织中的表达与病理类型及年龄无关，与临床分期有关，20例pT1和pT2期的肿瘤中强阳性者4例，阳性者15例，阴性1例；6例pT3和pT4期的肿瘤中5例为强阳性，1例阳性。临床分期为pT3、pT4期的肿瘤较pT1、pT2期肿瘤β-环连蛋白的表达明显增加（P＜0.01）。
2．Western blot:β-环连蛋白在肾癌癌细胞浆内的表达比其在正常肾组织细胞内的表达量明显增加（P＜0.01）。
3．RT-PCR：以每例标本癌组织和正常肾组织中β-环连蛋白与β-actin灰度值的比值，经秩和检验两组数据比较，差异无统计学意义（P＞0.05）,说明癌组织中β-环连蛋白基因的表达并无增加。
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