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实验犬环杓后肌功能重建的组织化学研究及图像分析 |
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黄秀琴 蒋淑萱** 吴 平* 张德芳* 王正强*
梁伟平* 陈贤明* 马丽梅 李 坪
(昆明医学院组织学胚胎学教研室，**寄生虫学教研室，昆明 650031
*昆明医学院附属二院耳鼻咽喉科)
摘 要 为了确定并比较实验犬两种不同术式：Ⅰ.颈袢胸骨舌骨肌支肌蒂移植术；Ⅱ.副神经胸锁乳突肌支肌蒂移植术，治疗声带麻痹的效果。建立单侧联合性声带麻痹动物模型，分别用Ⅰ、Ⅱ两种术式移植神经肌蒂于失神经的环杓后肌(PCAM)。术后4个月取各组PCAM做超微结构检查，并做光镜组织化学：乙酰胆碱酯酶(AChE)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、三磷酸腺苷酶(ATPase)、糖原(PAS)反应。用图像分析定量并测示肌纤维直径。结果发现两种术式都能使PCAM恢复功能，第Ⅱ种术式组织化学结果优于第Ⅰ种术式。为治疗声带麻痹提供了重要的理论根据。
关键词 声带麻痹 环杓后肌 神经肌蒂 组织化学 图像分析
喉部肿瘤、创伤、手术等可引起喉麻痹。当双侧损伤时声带固定于旁中位，常引起严重的呼吸困难。永久性气管造瘘、杓状软骨切除或声带外移等治疗方法，均累及发音功能，并易发生各种并发症。因此实现环杓后肌(posterior cricoarytenoid muscle,PCAM)神经再支配来恢复声带外展功能是更为合理的治疗方法。神经肌蒂(neuromuscular pedicle,NMP)移植术被认为是实现喉内肌神经再支配的有效方法［1］。本研究通过对实验犬进行两种不同术式NMP移植于失神经的PCAM后，进行电镜、光镜的形态结构观察，并做组织化学图像定量分析，比较两种术式治疗声带麻痹的效果，现报道如下：
材料和方法
1. 建立单侧联合性声带麻痹动物模型［2］
健康成年犬20只，体重8～12kg,雌雄兼用，全麻下先后切断左喉上神经外侧支和左喉返神经，并剪掉2cm，造成左侧联合性声带麻痹。切断神经后，再行肌电图检查，证实已切断的神经与相应肌肉间的连接已不存在，单侧联合性声带麻痹模型建立。
2. 神经肌蒂移植术
将上述实验犬随机分为A、B、D 3组。A组为手术Ⅰ组，在左PCAM中部移植左颈袢胸骨舌骨肌支NMP。 B组为手术Ⅱ组，在左PCAM中部移植左副神经胸锁乳突肌NMP。 D组不作NMP移植。术后注射青霉素2d。A、B、D 3组在同等条件下饲养4个月。
3. 取材
术后4个月各组犬完成发音及肌电图检查后，完整取下PCAM及部分环杓侧肌及环甲肌。观察各肌肉一般形态、大小、体积并行两侧比较。A组共取术侧PCAM 8个样本(因有1只犬病死)。B组共取术侧PCAM8个样本(因有1只犬中途死亡)。D组取术侧PCAM、环杓侧肌各2个样本，另取B组术侧环甲肌2个样本，共计6个样本，作为去神经后，非移植组对照。取A、B、D各组健侧PCAM共18个样本以及D组健侧环杓侧肌2个样本，合计20个样本作为正常对照，并设为C组。
4. 形态结构观察
(1) 石蜡包埋切片，做HE染色及AgNO3染色。(2)磷钨酸苏木精(PTAH)染色。(3) Carnoy加1%高碘酸混合固定液固定氧化24h做PAS整块染色。(4)氯化金染色铺片显示运动终板(motor end-plate,MEP)。(5)做超薄切片，在JEM-100CX型电子显微镜下观察肌纤维及神经形态结构并摄片。
附表 实验犬环杓后肌功能重建的组织化学、肌纤维直径
图像分析结果及显著性检验
Table Histochemistry and image analysis
of muscle fiber s diameters on recovery of
posterior cricoarytenoid muscle s
function in Dog and its significance test
名 称
name 组别
group 样本数
number of
sample 细胞数
number
of cell ±s
乙酰胆碱酯酶 A 8
400 6.6116± 1.1943▲
AChE B 8 400 7.7309± 0.9594△
C 20 1 000 8.4484&[1] [2] 下一页
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