|
实验性脾虚证大鼠胰岛细胞的免疫组织化学研究 |
| |
ls and SOM in D cells are apparently elevated.Conclusion This study suggests that the disorder of islet cell secretory activity seems to be intimately related to the metabolic abnormality in the spleen deficiency syndrome.
【Key words】 Pancreatic islet cells; Experimental spleen deficiency syndrome; Immunohistochemistry; Rat
近年对脾虚证患者和实验性脾虚证动物的研究表明，脾虚证是一组比较集中反映“脾”功能低下和紊乱的综合征候群［1］。脾虚证患者和动物模型的能量代谢、糖和蛋白质代谢以及食物消化和吸收均有明显变化。有研究表明，实验性脾虚证时血糖水平的调节能力下降，血糖浓度处于较低水平［2］。另有研究证明，胰岛激素与某些内脏疾患恢复过程相关［3，4］。但脾虚证时胰岛激素分泌活动有无变化，尚未见研究。为此，我们应用免疫组织化学法和显微分光光度计定量测定法，从形态学角度探讨实验性脾虚证大鼠胰岛细胞激素的变化，以了解胰岛内分泌活动与脾虚证的关系。
材料和方法
1. 动物分组及标本制备
成年雄性Wistar大鼠(Ⅱ级动物，中国医学科学院实验动物繁育场提供)24只，体重130～150g，分为4组：对照组5只、实验性脾虚组(脾虚组)7只、自然恢复组5只、中药治疗组(治疗组)7只。脾虚组用破气苦降药与饮食失节相结合的方法，制成脾虚证模型。破气苦降药成分剂量按厚朴∶枳实∶大黄为3∶3∶3的比例，冷水浸泡20min，煮沸20min，过滤浓缩成100%煎剂(含生药1 000g/L煎剂)，隔日灌服2次/d，3ml/次(药量为生药2g/100g体重)。喂药当日禁食，次日正常饮食，喂养42d，致成脾虚证模型。对照组按脾虚组给药法灌服自来水，3ml/次，但饮食不限，饲养42d。治疗组在动物致脾虚后，用加味四君子汤治疗，汤剂成分的剂量按灸黄芪∶党参∶茯苓∶炒白术∶灸甘草为2∶2∶2∶2∶1的比例，制成100%煎剂(含生药1 000g/L煎剂)，隔日灌服，2次/d，3ml/次(相当于生药1.5g/100g体重)，正常饮食，喂养21d。自然恢复组在动物致脾虚后，按治疗组给药法隔日灌服自来水，2次/d，3ml/次，正常饮食，喂养21d。
4组动物同时取材，取材前禁食12h。腹腔注射6%水合氯醛(0.5ml/100g体重)麻醉，心脏取血处死。取胰尾入Bouin液固定，按常规制成6μm厚的石蜡切片，在相同条件下同时进行免疫组织化学染色。
2. 免疫组织化学染色
2.1 胰岛B细胞染色：切片脱蜡入水，入3%甲醇-H2O2，室温30min,PBS洗；入正常羊血清(1∶20)，室温30min；隔片滴加兔抗胰岛素(Ins)抗血清(1∶100，美国Zymed公司)，室温30min，PBS洗，邻片滴加兔抗胰岛淀粉样多肽(IAPP)抗血清(1∶4 000，美国Peninsula公司)，4℃过夜，PBS洗。滴加HRP标记的羊抗兔IgG，室温10min，PBS洗；滴加H2O2-AEC(aminoethyl carbazole)显色剂(6A、6B、6C各1滴加入1ml蒸馏水中)(美国Zymed公司)，室温10min;蒸馏水洗，封片剂封片。
2.2 胰岛A细胞和D细胞染色：前面步骤同上。隔片滴加兔抗胰高血糖素(Glu)抗血清(1∶100，美国Zymed公司)，相邻切片滴加兔抗生长抑素(SOM)抗血清(1∶100，美国Zymed公司)，4℃过夜：PBS洗。滴加生物素标记的羊抗兔IgG，37℃ 30min,PBS洗；滴加HRP标记的链霉卵白素，37℃ 30min；滴加DAB显色剂(DAB 6mg溶于0.05mol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.6)20ml内，磁棒搅拌30min，加3%H2O2 40μl)室温10min。经自来水和蒸馏水洗，甘油明胶封片。
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 鸡胚房间隔与第二孔的形态发生
下一个医学论文： 金属硫蛋白与心肌血管内皮细胞的特异结合
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文