帕金森病大鼠模型多巴胺转运蛋白125I CIT放射自显影研究

　　【Key words】　Carrier proteins; Parkinson disease；　　125I-β-CIT; Autoradiography

　　帕金森病（Parkinson disease,PD）病理基础是中脑黑质多巴胺(DA)能神经元及黑质纹状体通路变性死亡。中枢多巴胺转运蛋白(DAT) 位于DA能神经元突触前膜。中脑黑质DA能神经元变性将累及纹状体部位DA能神经终末DAT的密度。DAT密度的改变与DA能神经元数量的变化相一致［1］。黑质DA能神经元数量可以通过DAT功能显像进行半定量检测，为临床PD辅助诊断提供一种手段。

　　材料和方法

　　1．黑质部分和完全损毁PD大鼠模型制备［2］:SD大鼠60只，雄性，体重200～250 g。取20只大鼠，借助大鼠脑立体定向仪，将6-羟基多巴胺（6-OHDA）溶液12 μg/6 μl分2点注射至大鼠右侧黑质致密部，坐标定位：1点为前囟后5.0 mm，旁正中1.9 mm，硬膜下7.1 mm；另1点为前囟后5.0 mm，旁正中2.3 mm，硬膜下6.8 mm。2～3周后腹腔注射阿朴吗啡(APO) 0.1 mg/kg体重，取APO诱发旋转次数小于3转/min者作为黑质部分损毁模型。取另外40只大鼠，在上述黑质部位注射2点的基础上，于内侧前脑束(MFB)注射8 μg/4 μl 6-OHDA，坐标为：前囟后4.4 mm，旁正中1.7 mm，硬膜下7.7 mm。将APO诱发的旋转次数大于7转/min者作为黑质完全损毁模型。

　　2．125I-β-CIT［甲基-3β-（4-碘苯基）托烷-2β-羧酸盐］的标记［3］：采用氯胺-T法标记125I-β-CIT，标记率为75%～80%，放射化学纯度＞95%。

　　3．模型动物脑放射自显影：取正常大鼠、黑质部分损毁及完全损毁模型大鼠各6只，经尾静脉注射取125I-β-CIT 40 μCi，于注射后4 h断颈取脑，冰冻切片，与GS-250自显影仪扫屏显像曝光8 h，用图像分析系统对每只大鼠两侧相同的纹状体区分析4～6张脑片。对每张脑片图像的两侧纹状体及额叶皮层相对称的部位选取1个相同形状及面积大小的感兴趣区（ROI），对每个ROI进行光灰度测定，并计算各组同侧纹状体/皮层(ST/CX)灰度的比值，取其平均值，这一比值代表纹状体的相对放射计数，亦代表其DAT密度，可反映其纹状体DA能神经末梢以及黑质DA能神经元数目的变化。

　　4.高效液相-电化学法检测（HPLC-ECD）模型动物DA及其代谢产物含量：每组各取4只大鼠，麻醉后断头，在干冰上分离出双侧纹状体并称重，HPLC-ECD检测。

　　5.模型动物黑质及纹状体免疫组化染色：每组各取1只，经4%多聚甲醛灌注后，于纹状体和黑质部位冰冻切片，片厚50 μm，进行免疫组化ABC法酪氨酸羟化酶（TH）染色。

　　6.统计学处理：组内左右侧及组间比较采用Student t检验。

　　结果

　　1.动物脑组织放射自显影观察：正常大鼠纹状体区冠状位图像清楚可见纹状体部位有放射性浓集，左、右侧灰度相当。皮层、伏隔核以及黑质部位亦有轻度放射性浓集。黑质部分损毁及完全损毁模型损毁侧纹状体放射性浓集降低，黑质完全损毁模型降低更明显（图1）。黑质部分损毁模型右侧ST/CX比值较左侧降低了18%；黑质完全损毁模型降低了72%。从表1中可以看出模型动物左右侧纹状体之间ST/CX比值存在显著性差别，随着损毁程度加重，DAT密度降低明显，表明DAT密度降低程度与损毁程度成正比，β-CIT DAT功能显像可以反映早期黑质纹状体系统的病理变化及变化程度。

表1　125I-β-CIT在PD大鼠模型脑内ST/C比值及

　　各组间比较（±s）

　　(只)

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