|
实验性病毒性心肌炎病程中穿孔素表达水平的变化及其与心肌损害的关系 |
| |
nfiltration of inflammatory cells and myocardial necrosis gradually developed; from day 10
to 15 post-infection perforin expression level peaked and the above-mentioned lesions also became the most
serious； after day 20 post-infection, the expression levels of perforin gradually decreased, and myocardial
inflammation and necrosis gradually lightened with ingrowth of fibroblasts or collagen. (2)Dynamic changes of
perforin expression level showed significantly positive correlation with the changes of myocardial histopathologic
scores (r=0.95, P＜0.05). Conclusion Perforin-mediated cytotoxicity might play an important role in the
development of viral myocarditis.
【Key words】 myocarditis T-lymphocytes, cytotoxic perforin
细胞介导的细胞毒性(cell-mediated cytotoxicity, CMC)被认为是病毒性心肌炎(viral
myocarditis, VMC)中心肌细胞损伤的主要机制之一。穿孔素(perforin , pore-forming protein,
cytolysin; PFP)是激活的自然杀伤(NK)细胞及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)等CMC效应细胞释
放的效应分子，它能损伤靶细胞而致其死亡。Seko等［1］及我们［２］的研究均证实柯
萨奇B3病毒(CVB3)心肌炎小鼠心肌炎症细胞可表达PFP。本研究首次观察了小鼠心肌炎
发病过程中PFP表达水平的动态变化及其与心肌病变的关系。
材料与方法
2.半定量RT-PCR：采用异硫氰酸胍一步法提取心肌标本的总RNA。按AMV逆转录试剂
盒(Promege公司)说明合成第一条cDNA。按PCR试剂盒(Promege公司)说明进行DNA扩增，
PFP引物序列：5′-AGG CAG CTG CTA ATA TCA AT-3′和5′-TGT GCT GTT TCT TCT TCT
CC-3′；同时以看家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,
GAPDH)引物进行PCR扩增作为参照，GAPDH引物序列：5′-CCA CCA CCA TCT TCC AGG
AG-3′和5′-CCT GCT TCA CCA CCT TCT TG-3′；扩增参数：94℃ 5分钟、94℃30秒、
59℃45秒、72℃ 60秒，25个循环后72℃延伸10分钟。此外，为减少误差尚采取了下列措
施：所有逆转录反应均以oligo dT12-18为反义引物；逆转录及PCR反应中的通用试剂均
先混合后再等量分装于各反应体系；经预试验确定20～25个循环较为理想即PCR产物条密
度与循环数呈线性关系；每个PCR反应均重复1次，只有两次反应的结果相差小于10%者，
才用于半定量分析；以PFP小鼠全长cDNA为模板进行扩增，作为PCR产物的片段大小及特
异性阳性对照。每个标本取扩增产物10μl于1.5%的含溴乙锭的琼脂糖凝胶电泳，以PCR
Marker(Promege公司)作为标准分子量参照进行产物鉴定。用SX-100图像扫描仪(上海四星
公司)扫描测定PCR产物电泳条带的密度，计算PFP产物的相对量。计算公式为：PFP相对
量=PFP产物电泳条带上一页 [1] [2] [3] 下一页
上一个医学论文： 非诺贝特对高甘油三酯合并低高密度脂蛋白冠心病患者前列环素活性的影响
下一个医学论文： 病毒性心肌炎与扩张型心肌病血清抗M受体抗体研究
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 内科论文 >> 正文