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HBV变异株与野毒株特异免疫应答的差异 |
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王延军 王晓燕 玄恩余 曲春枫 郭少愚 李在连
乙型肝炎病毒HBeAg阴性变异株的出现及演变涉及病毒突变和选择条件两个方面［1］，目前造成HBV突变的免疫因素尚未阐明。抗-HBe特异免疫应答主要由分泌不同细胞因子的CD4+T辅助细胞(TH)亚群调节［2，3］，为分析不同亚群在HBV突变中的作用，对不同乙型肝炎(乙肝)患者的TH1、TH2亚群进行了研究，现报告如下。
材料与方法
一、病例来源
为山东省潍坊市人民医院和东营市胜利油田中心医院1995年9月至1996年6月间住院或门诊随访的乙肝患者，年龄20～60岁;其中HBeAg阳性、抗-HBe阴性患者13例，HBeAg阴性、抗-HBe阳性患者60例。
二、HBeAg阴性变异株的检测
采用斑点杂交，方法详见文献［4］。聚合酶链反应(PCR)引物序列为：P24：5′-CCTAAGCTTGACATAG-CTGACTACTAATTC-3′，P32：5′-CA-GGAATTCTGTAGGACTAAATTGG-TCTGTTC-3′。探针分别为：野毒株序列M0(1887-1908)：5′-TGGGTGGCTTTGGGGCATGGAC-3′；常见的HBeAg阴性变异株序列M1(1888-1908)：5′-GGGTGGCTTTAGGGCAT-GGAC-3′及M2(1887～1908)：5′-TGGGTGGCTTTAGGACATGGAC-3′。
三、抗-HBe效价的测定
采用ELISA法深圳月亮湾生物工程有限公司试剂盒(批号9607006)，按说明书操作。
四、淋巴细胞因子的诱生及检测
参照Lohn等［2］法，抽取外周血，分离PBMC，调节细胞浓度至5×106/ml,加0.1mg/ml PHA及5%人AB型血清，37℃培养，分别于24(测IL-4)、32(IL-2)、48(IFN-γ)和72(IL-6)小时收集上清。用Genzyme公司ELISA试剂盒检测。
五、统计学处理
资料统计采用四格表χ2检验，t检测，秩和检验。
结果
一、突变株的检出情况
13例HBeAg阳性乙肝患者中，血清HBV DNA阳性12例；60例抗-HBe阳性患者中，HBV DNA阳性11例；HBeAg阳性组野毒株感染率为91.7%(11/12)，HBeAg变异株感染率为0，混合感染率为8%(1/12)；抗-HBe阳性组野毒株感染率为0，HBeAg阴性变异株感染率为45.5%(5/11)，混合感染率为27.3%(3/11)；经四格表χ2检验，HBeAg阴性变异株感染率在抗-HBe阳性组显著高于HBeAg阳性组(χ2=9.304，P<0.01)。
二、血清抗-HBe效价测定结果
见表1。
表1 乙肝患者血清抗-HBe效价的比较(s)
组别 例数 滴度 平均滴度
原液 50 100 200 400 800 1 600 3 200
突变组 9 2 3 2 2 635.33±2.87
PCR(-) 17 4 2 5 3 3 77.45±3.78
注：经两均数的t检验，突变组显著高于PCR(-)组(t=379.51,P＜0.01)
三、淋巴细胞因子IL-2，IFN-γ、IL-4及IL-6检测结果
见表2。
表2 不同组PBMC培养上清中TH1、TH2型细胞因子含量的比较()
组别 例数 IFN-γ(pg/ml) IL-2(pg/ml) IL-4(pg/ml) IL-6(ng/ml)
Con 5 173.8±225.6 106.3±55.4 ＜6 3.73±0.04
M0 5 783.4±673.0 140.9±74.0 ＜6 3.69±0.56
M1/M2 5 471.1±586.[1] [2] 下一页
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