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Octreotide治疗Graves眼病机理探讨 |
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可能的作用机理，并为将来筛选治疗GO的有效药物作体外实验准备。
材料和方法
一、主要试剂
鼠抗人ICAM-1单克隆抗体及羊抗鼠IgG，美国Calbiochem-Novabiochem公司产品：3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)，中科院上海原子核研究所产品，比活度为28Ci/mmol。
二、细胞因子
TNF-α、γ-干扰素(INF)和白介素(IL)-1β：美国Immurex公司产品；Octreotide：瑞士Sandoz药厂提供。
三、细胞来源和培养
眼外肌(部分)及周围结缔组织取自一位34岁因眼球萎缩行右眼球摘除术的女病人。按照Bahn的方法〔1〕，进行原代和传代细胞培养。实验中为防止多次传代使细胞的某些功能发生较大的变化，仅选用3～10代的细胞。
四、细胞ICAM-1表达的测定
在96孔板中，加入浓度为3×104/ml的人眼球后成纤维细胞悬液，置37℃、5% CO2条件下培养24小时后加入不同药物，同时设不加药物的阴性对照，每个浓度设3或6个复孔，继续在相同条件下培养24和48小时，4℃用75%乙醇固定30分钟，37℃每隔1小时 先后加入牛 血清白蛋白、鼠抗人ICAM-1单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG和O-次苯基二胺(OPD)，20分钟后测OD值。
五、细胞DNA测定
在96孔板中，加入浓度为3×104/ml的人眼球后成纤维细胞悬液，置37℃、5% CO2条件下培养24小时后加入不同药物，同时设不加药物的阴性对照，每个浓度设3或6个复孔，继续在相同条件下培养48小时，结束前18小时每孔加入3H-TdR0.5～1.0μCi。收集细胞，测定cpm。
六、统计学处理
对各组间均值作Newman-Keuls检验。
结 果
一、Octreotide对TNF-α刺激作用的罱响(表1)
浓度为103 U/ml的TNF明显刺激人眼球后成纤维细胞，使其表达ICAM-1增强。而Octreotide能明显影响TNF-α的这种刺激作用，当Octreotide浓度为5 ng/ml时，抑制作用最明显；高浓度则表现为刺激作用。TNF-α及Octreotide共同培养对人眼球后成纤维细胞DNA合成的影响，变异较大，基本上以抑制作用为主。
表1 Octreotide对TNF-α刺激作用的影响
Tab 1 Effects of octreotide on the stimulation by TNF-α
分组
Group ICAM-1 DNA合成
DNA biosynthesis
n 24小时
24h n cpm
对照
Control 6 0.017±0.010 6 1320.67±187.89
TNF-α
Octreotide 103U/ml 3 0.630±0.030## 3 1320.00±94.43
0.5ng/ml 3 0.547±0.040* 3 1005.33±138.05*
5ng/ml 3 0.513±0.042** 3 1363.33±128.34
50ng/ml 3 0.663±0.032 3 1176.00±108.06
500ng/ml 3 0.727±0.064* 3 1040.00±101.82*
5μg/ml 3 0.757±0.012** 3 962.00±56.90**
注：与对照组相比 Compared with control,#P＜0.05,##P＜0.01；与TNF-α组相比 Compared with TNF-α，*P＜0.05,**P＜0.01
二、Octreotide对γ-INF刺激作用的影响(表2)
实验发现加入γ-INF(浓度为10上一页 [1] [2] [3] 下一页
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