min 30 s,6%氧浓度4 min,6%～5%氧浓度3 min 40 s,5%氧浓度2 min,5%～4%氧浓度5 min,4%氧浓度1 min[4]);缺氧LTG组(n=26)：同上方法制作急性缺氧模型，缺氧前0.5 h已腹腔注射LTG(20 mg·kg-1);常氧生理盐水组(n=26)：腹腔注射等量生理盐水后放入常氧浓度的相同装置;常氧LTG组(n=26)：腹腔注射等量LTG后放入同上的常氧浓度装置。
1.2 方法
1.2.1 药物惊厥易感性测定
生后30 d，分别给予各组8只大鼠每隔5 min腹腔注射致痫药戊四氮(PTZ)(Sigma公司)10 mg·kg-1,直至出现第1次后冲性肌阵挛的发作,即肌阵挛导致头和肩向后抽动[5]。记录出现第1次后冲性肌阵挛或全身性阵挛发作所需的时间(即潜伏期)及注射的药物总剂量。
1.2.2 组织切片制备及染色
1.2.2.1 切片制备 (1) 石蜡切片：造模后1 h及生后30 d,分别予各组6只大鼠2%戊巴比妥过量麻醉,左心室插管灌注4%多聚甲醛固定取脑，然后继续用4%多聚甲醛后固定12 h后取海马部位的脑组织常规石蜡包埋，在视交叉后1 mm处做冠状切片，用作尼氏染色。(2) 冰冻切片：生后30 d,分别予各组6只大鼠2%戊巴比妥过量麻醉,先后灌注0.4%硫化钠,2%多聚甲醛和1.5%戊二醛混合液固定取脑，再用4%多聚甲醛后固定24 h，最后置于30%的蔗糖溶液中过夜,待鼠脑沉底后，在海马部位做冠状冰冻连续切片,切片厚30 μm，用作Timm染色。
1.2.2.2 尼氏染色 取石蜡切片，脱蜡后入二甲苯溶液3 min,然后依次浸入100%、95%、70%的酒精各3 min，蒸馏水浸洗3 min，然后入1%的甲苯胺蓝染色6～10 min，最后蒸馏水冲洗,梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
1.2.2.3 Timm染色 将冰冻切片自然晾干,三蒸水冲洗，然后放入预先配制的混合液中(该混合液含有50%阿拉伯树胶120 ml、5.78%氢醌60 ml、51%柠檬酸10 ml、47%柠檬酸钠10 ml),染色前将17%硝酸银溶液1.4 ml放入上述混合液中，置于黑暗处孵育40～60 min,流水冲洗15 min终止染色。切片自然晾干后,梯度酒精脱水、透明、封片。半定量评分,评分标准按照苔藓纤维出芽分级表进行,观察CA3区和齿状回颗粒细胞上层苔藓纤维发芽的情况。
1.3 统计学处理
实验数据以±s表示,应用SPSS 13.0软件进行成组设计的单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 行为学观察
生后10 d新生大鼠被放入7%氧浓度的密闭装置约2 min后均出现了机械性咀嚼、点头，然后进展为呼吸困难、嘶叫及狂奔，全部达到了Lado评分的3.5级以上的惊厥发作，放回常氧环境中约2 min左右完全停止惊厥发作。缺氧生理盐水组与缺氧LTG组惊厥发作的程度及潜伏期没有明显差异(P>0.05)。放入缺氧装置的所有大鼠均未死亡，常氧装置中的新生大鼠均未有惊厥发作，亦无死亡。
2.2 药物惊厥阈值
生后30 d的各组大鼠经PTZ诱发后均出现惊厥发作。PTZ诱发惊厥的用量为50～80 mg·kg-1，缺氧LTG组为(58.57±3.77) mg·kg-1，缺氧生理盐水组为(52.50±4.62) mg·kg-1,常氧LTG组为(68.75±6.40) mg·kg-1，常氧生理盐水组为(66.25±5.17) mg·kg-1，缺氧生理盐水组大鼠引出惊厥发作的药物剂量最小，除了常氧两组间无差异，其余各组间均有明显差异(P<0.05)。出现肌阵挛抽动的平均潜伏期在缺氧LTG组为(27.14±1.57)分，缺氧生理盐水组为(24.12±2.16)分,常氧LTG组为(32.12±2.99)分，常氧生理盐水组为(31.62±2.82)分，缺氧生理盐水组大鼠出现后冲性肌阵挛的平均潜伏期显著短于其他各组(P<0.05)，除常氧两组间无差异外，其余各组均有差异(P<0.05)。缺氧LTG组惊厥发作时死亡1只，其PTZ剂量为70 mg·kg-1。
2.3 尼氏染色结果
各组大鼠在早期(造模后1 h)及晚期(生后30 d)两个时间点，CA1区、CA3区、齿状回颗粒细胞层、门区均可见大量排列紧密的锥体细胞和颗粒细胞，门区可见呈现蓝色的神经元,各区均未见明显的神经
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