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低强度He |
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陈长英1 刘瑞云1 黄振文1
脂质过氧化能损伤血管内皮细胞，促进动脉粥样硬化的形成和发展〔1〕。低强度氦-氖激光血管内照射(intravascular low-level laser irradiation on blood，ILLLI) 具有抗脂质过氧化损伤，加速自由基清除的功能〔2〕。本研究拟观察ILLLI对饲脂家兔血浆LPO、SOD浓度及主动脉内膜超微结构的影响，探讨ILLLI预防动脉粥样硬化的效果及作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物模型及实验设计
健康雄性日本大耳白兔40只，体重2.4～3.0kg，3～4月龄。随机分为4组：正常对照组（N）、高脂对照组（H）、激光治疗组（I）、舒降之治疗组（S），每组10只，分笼喂养。N组喂普通颗粒饲料，其余各组喂1%胆固醇颗粒饲粒。 每只进食量控制在100g/d，饮水量不限，实验时间共10周。
1.2 实验方法
实验开始后，Ⅰ组即行ILLLI治疗。激光的波长为632nm，输出功率1.5～2.0mW，工作电流8mA。家兔置于特制的兔盒中，选择兔耳缘静脉，常规消毒做静脉穿刺，再经静脉穿刺针导入激光针。当露出红色光斑（直径约10～15mm）时，用胶布固定激光针，使其与血管壁走向保持平行。每日照射1次，每次60min，10次为1疗程，间隔10天，共3个疗程。其余各组同样做耳缘静脉穿刺， 但无激光输出。 S组加舒降之2.5mg/kg*D溶于蒸馏水10ml中灌胃。其余3组每天也用蒸馏水10ml灌胃1次。
1.3 样本处理
实验开始前及实验第10周由兔耳中央动脉抽血。全血置于肝素钠抗凝管中混均抗凝，低速离心分离血浆，-20℃冰箱保存备测LPO、SOD,采用氧化脂质TAB不除蛋白快速测定LPO。采用羟胺发色法测定SOD。实验第10周末棒杀动物后， 立即在新鲜主动脉弓病变部位或病变好发部位取材，剥去外膜，切成1mm×1mm×1mm大小，依次用2. 5%戊二醛，1%锇酸固定，丙酮梯度脱水，再用环氧树脂812包埋， 经超薄切片和醋酸铀，枸橼酸铅双染色后，用日立H-600A型透射电镜观察分析，加速电压15kV。
1.4 统计学处理
结果参数以均数±标准差（）表示。各组前后比较用配对t 检验。4组间比较用F检验，继以q检验。以P<0.05为有显著性差异。
2 结果
2.1 家兔血浆SOD，LPO的变化
见附表。
附表 各组家兔血浆LPO、SOD结果比较（）
分组 LPO(mmol/L) SOD(μ/mg)
实验前 实验后 实验前 实验后
N组 7.69±2.11⑤ 8.25±2.25 2.41±2.05⑤ 22.71±4.33
H组 18.33±3.66②⑦ 8.21±1.44 13.45±2.93②⑦ 21.97±2.73
I组 13.38±3.45②③⑦ 9.87±2.77 18.01±3.63②③⑦ 20.04±4.51
S组 12.94±2.39②③⑦ 8.34±0.94 21.42±3.51①③⑤ 19.98±3.67
注：与N组比①P<0.05, ②P<0.01;与H组比③P<0.01。与S组比④P<0.05。同组实验前后比较⑤P>0.05，⑥P<0.05，⑦P<0.001。
2.2 透射电镜观察
N组：内皮细胞呈扁平状，细胞质中有吞饮小泡和少量微丝。 内皮下层和内弹性膜完整，中膜平滑肌细胞内有较多线粒体，形态规则，排列整齐。未见脂肪空泡。
H组：内皮细胞胞质中含有大量大小不等的脂滴，吞饮小泡和微丝明显减少。 内皮细胞下间隙明显扩张，可见平滑肌细胞、胶原纤维及絮状物。内皮下层平滑肌细胞含有数量不等的脂肪空泡，内弹力膜多不完整。中膜平滑肌细胞数量明显减少，排列紊乱，细胞内出现脂质堆积，胞浆内有较多脂滴及吞噬颗粒(图1)。
I组：内皮细胞，内皮下层及内弹性膜损伤轻微，脂质中含有少量脂滴；平滑肌细胞膜损伤轻微，胞质含有少量脂滴，平滑肌细胞及[1] [2] 下一页
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