原癌基因GFI1在急性白血病患者骨髓细胞中表达的研究

【摘要】  目的：研究原癌基因GFI-1在急性白血病患者骨髓细胞的表达。方法：采用PCR的方法检测GFI-1在急性白血病患者骨髓细胞的表达情况。结果：GFI-1在急性白血病患者骨髓细胞的表达呈阳性，正常人呈阴性。结论：GFI-1参与急性白血病的发病。

【关键词】  急性白血病;GFI-1基因；骨髓细胞

GFI-1（growth factor independence-1）在多种类型的血液细胞中均有表达，是一种对血细胞的增殖、分化起重要作用的原癌基因。GFI-1定位于人的1p22染色体[1] 。其编码的GFI-1蛋白是一个55 kDa的核蛋白并通过其特殊的序列结构（TAAATCAC（A/T）GCA）与DNA相结合[2] 。GFI-1蛋白其锌指末端含6个C2H2结构序列，其N-末端有一个含20个氨基酸的SNAG（Snail/Gfi-1）结构[3]。GFI-1正是通过这些结构与其目的基因相结合，抑制其目的基因的表达从而发挥其生物学效应[4-11]。

    ETO是8、21染色体易位产生的融合蛋白的一部分，与急性髓系白血病，尤其是M2的发病有关。McGhee等发现GFI-1与ETO及关联蛋白在体内、体外均有联系[12]。这说明GFI-1与急性髓系白血病的发病也有关系，但GFI-1在白血病的发病机制中所起的作用尚不清楚，是否与ETO的表达有关？

    1   材料与方法

    1.1   一般资料   初治急性白血病病例24例中男13例，女11例，年龄23~80岁，平均49岁。按FAB分型M1患者3例；M2患者4例；M3患者7例；M4患者4例；M5患者5例；ALL患者1例。并收集5例正常人骨髓作为正常对照。

    1.2   方法   （1）细胞分离：按常规方法用淋巴细胞分离液分离骨髓单个核细胞；（2）DNA提取：采用异硫氰酸肌法提取基因组DNA（晶美生物DNA提取试剂盒，按悦明操作）。实验所用标本经紫外分光光度计测定OD值在1.6～2.0间，浓度调整为200　mg·L-1，-20 ℃保存备用；（3）PCR引物：上游引物：5’-GTGAATTCTCGCTTCTCGCTTCTGTTCGC-3’，下游引物：5’-GAGAATTCTACAGGTGGGGTCTTTCA -3’，预期扩增产物长度150 bp（由上海生工合成）；（4）PCR检测：PCR反应体系50 μl，包括上、下游引物各10 pmol dNTP10 mmol，TaqDNA聚合酶1.25 U，模板DNA 200 ng；94 ℃ 预变性5 min，94 ℃变性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共计35次循环，最终延伸72 ℃ 5 min， 4 ℃保存备用。取 10 μl PCR扩增产物，经2％琼脂糖凝胶电泳观察结果。同时加入一对内参（β-actin 591 bp）的特异引物，扩增内参的DNA，作为对照。

    2   结      果

    急性白血病患者骨髓单个核细胞GFI-1表达呈阳性；正常人骨髓单个核细胞GFI-1表达呈阴性（图1）。

    运用Stata 7.0统计软件，使用等级资料秩和检验进行统计分析，认为急性白血病患者与正常人骨髓单个核细胞GFI-1的表达不相同（P＜0.01）。

    3   讨      论

    本实验通过对多种类型的急性白血病骨髓单个核细胞GFI-1表达情况的研究发现，不仅仅在M2型白血病骨髓单个核细胞GFI-1表达增高，在所有的急性白血病患者骨髓单个核细胞GFI-1表达均增高。这说明体内GFI-1的表达增高与急性白血病的发生有关。在G

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