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检测颗粒细胞凋亡对胚胎质量及其种植潜能的预测 |
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梁晓燕 庄广伦 周灿权 张敏芳 李蓉 李满 孔庆喻
从胚胎的角度看，目前临床上仅限于以镜下的形态学观察来确定移植胚胎的质量。 1997年Xia报道在单精子胞浆内注射（ICSI）治疗中，通过对卵母细胞评分、分级及相应移植胚胎的选择，显著提高了ICSI的临床妊娠率［1］。已证实卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡密切相关，因此推测，卵丘颗粒细胞的功能状态将直接影响卵母细胞的质量，这对于随后胚胎的生存潜能尤其重要。本研究对卵丘颗粒细胞的凋亡程度进行检测，评估卵母细胞和受精卵的质量，观察胚胎相应的卵丘颗粒细胞凋亡程度与临床妊娠率的关系，根据胚胎的卵裂细胞数及颗粒细胞凋亡检测结果选择移植胚胎，与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的临床妊娠率的关系。
一、资料和方法
1．研究对象：收集少、弱精及无精症要求行ICSI的患者共28例（28个周期），年龄23～38岁，平均(29.0±2.8)岁。不孕时间3～9年，因以下原因进行ICSI：（1）活动精子的数量<2000 000/ml；（2）前次周期的受精率<20%；（3）阻塞性无精症。所有患者使用相同促排卵方案：促黄体素释放激素(Busereline，德国Hoechst公司产品)/促卵泡成熟素(Metrodin，瑞士Serono公司产品；人体绝经期促性腺激素(Pergonal，瑞士Serono公司产品)，当至少4个卵泡的直径达到17 mm以上时，注射人绒毛膜促性腺激素Profasi瑞士Serono公司产品)10000 IU，36小时后，在B超指引下经阴道取卵，共取卵268个，平均每周期取卵9.5个，周期妊娠率为32%。根据是否妊娠分为妊娠组与未妊娠组进行比较。
2．方法：取卵后将卵母细胞置于37℃、5%二氧化碳培养箱内，用Earl培养液(美国Sigma公司产品)培养3～4小时，在40倍显微镜下把卵细胞移入40 IU/ml透明质酸酶(美国Sigma公司产品)中30秒，然后用吸管轻轻吹打下卵丘颗粒细胞。成熟卵母细胞（MII期）逐个进行显微注射。48小时后，根据镜下观察胚胎分裂的卵裂数及其评分选择移植胚胎［2］。ICSI的同时，分别收集上述患者每个卵母细胞相应的颗粒细胞，分别立刻移入75%的冰乙醇内，轻摇、过夜固定，用离心或稀释的方法调节细胞浓度至3～10×106个/ml。加入碘化丙锭标记细胞核的双链DNA及RNA，当发生凋亡时，细胞内DNA部分断裂成小片段，漏出细胞，DNA丢失，细胞核内DNA含量下降。经流式细胞仪检测DNA含量后，计算凋亡细胞所占的百分比，比较妊娠组、非妊娠组移植胚胎的相应颗粒细胞凋亡程度，及与卵裂细胞数、胚胎评分、妊娠率及年龄的关系。
3. 统计学方法：采用配对t检验及成组比较t检验。
二、结果
1．妊娠组中移植胚胎与未移植胚胎比较:妊娠组（9例）115个胚胎中，移植胚胎共37个（平均4.1个胚胎)，移植胚胎的凋亡指数为(6.6±2.9)%，显著低于未移植的胚胎的(10.7±4.3)%(P<0.05)。
2.非妊娠组移植胚胎与未移植胚胎比较:非妊娠组（19例）的153 个胚胎，移植胚胎共58个（平均3.1个胚胎)，卵丘颗粒细胞凋亡指数移植胚胎为(13.4±9.6)%，未移植胚胎为(14.5±9.4)%，(P>0.05)。
3. 妊娠组与未妊娠组比较:二组平均凋亡指数比较，差异有显著性(P<0.05)。妊娠组的平均年龄为(30.0±3.2)岁，未妊娠组为(31.2±4.6)岁，差异无显著性。年龄与凋亡指数之间在两组均无显著相关性。
两组的受精数及卵裂细胞数相似，选出的植入胚胎总评分相似(表1)。
表1 妊娠组与未妊娠组受精及卵裂数的比较(±s)
组别 总例数 受精数(个) 胚胎数(个) 植入胚胎总评分
妊娠组 9 8.5±4.2 8.2±4.2 21.6±1.9
未妊娠组 19 6.4±4.0 6.3±4.3 18.5±5.6
三、讨论
Hughes等［3］和Palumbo等［4］已证实，在正常卵巢的周期性卵泡发育过程中，各期卵泡的闭锁与颗粒细胞凋亡密切相关。过强的细胞凋亡会引起组织细胞的退化、萎缩及功能低下，卵丘[1] [2] 下一页
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