HPLC法测定WG胶囊中维生素E的含量

　　【关键词】 WG胶囊;维生素E;HPLC;含量测定

　　WG胶囊为维生素E及其他多种营养成分配伍制成的保健食品。维生素E可使垂体前叶促性腺分泌细胞亢进，分泌增加。临床用于习惯性或先兆性流产，女性不育，脂肪吸收异常等维生素E缺乏症，对于防止动脉硬化、肌肉萎缩、男性不育也有一定作用。在处方中，维生素E用量较大，而且在发挥处方疗效中起主要作用。因此，选择维生素E作为指标性成分对此保健食品进行质量控制。目前维生素E的主要分析方法有气相色谱法[1]与高效液相色谱法[2，3]等。本研究采用HPLC法对WG胶囊中维生素E的含量进行了测定。

　　1 仪器与试药

　　Waters 2695型高效液相色谱仪，Empower色谱工作站。SHIMADZU AY220型电子天平(准确到0.1mg)，Sartotius BP211D型电子天平(准确到0.01mg)。

　　维生素E对照品(购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号100062-200608)，甲醇为色谱纯(江苏汉邦科技有限公司，批号100056)，其余试剂均为分析纯。WG胶囊(自制，批号20100120、20100125、20100128)。

　　2 色谱条件

　　色谱柱：Agilent ZORBAX Extend C18柱，流动相为纯甲醇，流速为1.5ml/min，检测波长为285nm。理论板数按维生素E峰计算应不低于3000。

　　在此色谱条件下，维生素E与其他色谱峰分离良好，见图1、图2、图3。图1 阴性制剂色谱图　图2 维生素E对照品色谱图　图3 WG制剂色谱图

　　3 对照品贮备液的制备

　　精密称取维生素E对照品25.12mg，置10ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得维生素E对照品贮备液(2.512mg/ml)。

　　4 供试品溶液的制备

　　取本品装量差异项下的内容物，混匀，取约0.5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，避光，称重，超声处理(功率250W，频率 50EHz)20min，取出放冷，再称定称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　5 线性关系考察

　　精密量取维生素E对照品贮备液2ml，置10ml棕色量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀，即得5#对照品溶液;精密量取5#对照品溶液5ml置10ml棕色量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀，即得4#对照品溶液;以此类推，分别制得3#、2#、1#对照品溶液。

　　分别精密吸取以上1#至5#对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，依法测定，记录峰面积。每份溶液平行进样2次，以峰面积平均值为横坐标(X)，对照品溶液浓度(mg/ml)为纵坐标(Y)，进行线性回归。得维生素E回归方程为Y=-2329.75+1553149X(r=1.000)，结果表明维生素E进样量在314～5024μg范围内线性关系良好。

　　6 精密度试验

　　以3#对照品溶液为测定对象，依法连续进样6次，记录峰面积，得维生素E峰面积的RSD为0.22%，结果表明本法测定维生素E精密度良好。

　　7 重复性试验

　　取批号为20100120的本品6份，按“4供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液。分别精密吸取以上供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，依法测定，记录峰面积。每份溶液平行进样2次，以峰面积平均值按标准曲线法计算含量。重复性试验结果表明供试品中维生素E的平均含量为7.184mg/g，RSD为2.52%。见表3。含量(mg/g)=(平均峰面积-截距)(mg/ml)×25(ml) 斜率×称样量(g)表3 维生素E重复性试验

　　8 稳定性试验

　　以“7重复性试验”第一份供试品溶液为研究对象，每隔2h进样1次，每次精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，记录峰面积，共测定7次，RSD为1.34%，表明供试品溶液中维生素E在12h内稳定。见表4。表4 维生素E稳定性试验时间(h) 峰面积 平

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