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亚甲蓝光敏法消毒血浆的影响因素研究 |
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张文福 袁庆霞 钟儒波 刘蓉 刘育京
提要 试验观察了对亚甲蓝光敏法灭活人血浆中病毒的影响因素。结果，血浆中亚甲蓝浓度、光照强度、血浆pH值、血浆容量和作用时间的影响较明显，温度的影响较小。
关键词 血浆消毒 亚甲蓝 光敏法 病毒灭活 影响因素
STUDY ON FACTORS INFLUENCING DISINFECTION OF PLASMA
BY METHYLENE BLUE PHOTODYNAMIC METHOD
Zhang Wenfu Yuan Qingxia Zhong Rubo Liu Rong Liu Yujing
(Institute of Microbiology and Epidemiology,
Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071)
Abstract
The factors influencing inactivation of virus in human plasma by methylene blue photodynamic mehtod were observed experimentally. The results indicated that the influences of plasma concentration of methylene blue, intensity of light illumination, pH of plasma, plasma volume and exposure time were obvious, while the influence of temperature was slight.
Key words plasma disinfection methylene blue photodynamic method virus inactivation influencing factor
血浆是临床输血中的一个主要成分，对血浆作病毒灭活处理将显著提高临床输血的安全性。亚甲蓝光化学法可消毒处理单袋人血浆，对经血液传播的主要病毒，如HIV、HBV、HCV等都具有灭活作 用［1］。我国对该领域的研究工作仍处于实验室阶段［2］。我们继亚甲蓝光敏法对人血浆中病毒的灭活研究［3］之后，对其消毒血浆的影响因素进行了系统观察。现将结果报告如下。
1 方法
1.1 病毒的培养
试验病毒为辛德毕斯病毒（Sindbis virus, SV）、水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus Indiana serotype, VSV）。分别用中国仓鼠细胞（BHK-13）与白人咽癌上皮细胞（Hep-2）培养。2种病毒株和细胞株均由中国预防医学科学院病毒所引进。细胞培养液为RPMI1640培养基（GIBCO-BRL公司产）加新生牛血清（杭州四季青生物材料研究所产）。
1.2 血浆消毒处理
将临床用冰冻人血浆（中国人民解放军中心血站提供）经30℃水浴融化，再加入亚甲蓝染料（Sigma公司产），充分混匀10 min，使染料与病毒结合。再经红色光（波
全军医药卫生科研基金课题（编号：9608022）
长640～700 μm）照射处理灭活病毒。对消毒处理前后的血浆，分别测定其病毒滴度。测定时，采用10倍稀释法将血浆稀释，各稀释度分别于96孔细胞培养板上接种4孔细胞。培养3 d后，在倒置显微镜下观察细胞病变，最后计算各实验组的半数组织感染剂量（TCID50）［4］。
2 结果
2.1 药物浓度对病毒灭活的影响
以VSV作为指示病毒，单用亚甲蓝而不经光照，试验发现，当亚甲蓝浓度由0.01 μmol/L升至10 μmol/L，处理作用10 min时，对人血浆中VSV的灭活率变化不足1个对数滴值（图1）。
图1 不同MB浓度对VSV灭活的效果
Fig 1 Efficacy of MB at different concentrations
in inactivating VSV
2.2 光强度对病毒灭活的影响
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