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非小细胞肺癌中p16基因的突变研究 |
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傅松滨 王柏秋 黄承滨 刘权章 张贵寅 李璞
【摘要】 目的 探讨p16基因在非小细胞肺癌发生发展过程中所起作用。方法 应用PCR与双链DNA直接测序技术对40例非小细胞肺癌中p16基因外显子2的纯合缺失与序列改变进行了研究。结果40例非小细胞肺癌中有2例存在p16基因外显子2的纯合缺失；14例肿瘤DNA样品中检出p16基因外显子2的19个点突变和1个移码突变。其中8个突变位于121位密码子中380位碱基处。结论 p16基因点突变在非小细胞肺癌中发生频率较高，是参与非小细胞肺癌发生发展的主要突变形式。非小细胞肺癌中p16基因的突变热点为121位密码子中380位碱基的转换与颠换。
【关键词】 非小细胞肺癌 p16基因 突变
Mutation analysis of p16 gene in non-small
cell lung carcinomas
FU Songbin*, WANG Baiqiu, HUANG Chengbin, LIU Quanzhang, ZHANG Guiyin, LI Pu.*Department of Medical Genetics, Harbin Medical University, Harbin, 150086 P.R.China.E-mail:[email protected]
【Abstract】 Objective To investigate the role of p16 gene in the tumorigenesis of non-small cell lung carcinomas (NSCLC).Methods Homozygous deletion and mutation of exon 2 of p16 genes in 40 NSCLC tissues were analyzed using PCR and dsDNA direct sequencing technique.Results In 2 NSCLC tissues, homozygous deletions of p16 gene were detected; in 14 NSCLC tissues, 19 point mutations and a frameshift were detected.Conclusion Point mutations of p16 gene were frequent and might play a role in the initiation and progression of NSCLC. Nt380 in this gene was a hot spot of mutation.
【Key words】 Non-small cell lung carcinoma p16 gene Mutation
1994年，两个美国的实验室几乎同时发表了有关p16基因的研究工作［1，2］。p16基因编码一个15 872U(16kD)的蛋白质，此蛋白质是一种细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)的抑制因子(CDK4I)。p16基因的完整编码序列包括2个内含子和3个外显子，其中5′端126bp区域为外显子1，中间307bp为外显子2，3′端11bp区为外显子3。
1 材料与方法
1.1 肺癌手术标本的取材及基因组DNA提取 40例肺癌标本取自哈尔滨医科大学附属第二医院。取材前患者均未接受放射治疗和化学治疗。采用常规的酚-氯仿抽提法提取基因组DNA。
1.2 肺癌p16基因PCR扩增与纯化 应用从肺癌及对应正常组织中提取的基因组DNA为模板，以含p16基因质粒作对照，PCR扩增基因组DNA中p16基因外显子2。PCR反应条件：10μl反应体积中含模板DNA 100ng。Taq DNA聚合酶(Promega公司)0.5U，50μmol/L 4×dNTP(Promega公司)，引物各10pmol/L，1.5mmol/L MgCl2，20mmol/L Tris-HCl(pH8.3),25mmol/L KCl，0.05% Tween 20，牛血清蛋白100μg/ml。引物序列为P1：5′-GGAAATTGGAAAC-TGGAAGC-3′；P2：5′-TCTGAGCTTTGGAAGCT-CT-3&prime[1] [2] [3] 下一页
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