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细胞色素P450IA1与食管癌遗传易感性 |
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究对象：111例病例来自1997年9月～1998年10月第四军医大学第一和第二附属医院胸外科由病理学确诊的食管癌连续病例，并且要求无任何其他部位肿瘤, 未经放疗和化疗。对照组Ⅰ（44例）来自同期在消化科内镜室检查的非肿瘤门诊患者，对照组Ⅱ（70例）属健康体检者，且年龄在45岁以上。两组均为在西安地区生活15年以上的常住居民，年龄、性别职业等分布均衡。
2.调查内容：一般人口学特征及食管癌危险因素（吸烟、饮酒、家族史等）。
3.标本收集：病例标本来自手术切除的食管癌组织; 对照组Ⅰ的标本是内镜下取材的食管组织; 对照组Ⅱ为被检者静脉血5 ml，离心去血清后剩余的血凝块。均保存于-70℃冰箱。
4.实验: 模本DNA的提取, 将研磨后的食管组织或被吹打细碎的血凝块组织经蛋白酶K消化后，用酚-氯仿抽提数次、乙醇和Na+沉淀、DNA溶解液溶解后保存于-20℃。
PCR反应, 每例DNA模本分别经引物P1(5′-CGGAAGTGTATCGGTGAGACC-3′)与P2(5′-GTAGAC- AGAGTCTAGGCCTCA-3′), P1′(P1的3′端A→G)与P2（分别编为a管和b管）进行PCR扩增，产物约为200 bp片段。反应混合物含10×Buffer(1.5 mmol/L Mg2+)、200 μmol/L dNTP、2种引物各0.25 μmol/L、1 U TaqDNA聚合酶，其余以水补足总体积至50 μl。PCR循环条件为：94℃变性55 s、60℃复性1.5 min、72℃延伸1 min，经35个循环后继续在72℃延伸7 min。
电泳及结果判定, PCR反应产物于2.0% Agarose凝胶、电泳缓冲液中，在电压40 V、电流25 mA的条件下进行电泳。电泳后于300 nm的紫外光透射分析仪上观察、拍照。电泳后凝胶上的同一模本显示2条200 bp的条带则为Ile/Val杂合体；若只显示其中1条，则为Ile/Ile或Val/Val型（图1）。
a、b分别代表Ile、Va1等位基因，2、4为A型，1为B型，3为C型，5为阳性对照，M为100 bp的DNA Ladder
图1 CYP450IA1基因型检测PCR扩增产物电泳结果
5.主要设备和试剂：TaqDNA聚合酶、dNTP购自华美公司。PCR扩增仪为PE公司产480型，紫外光透射分析仪为上海康华生化仪器厂产2 F型，电泳仪为北京六一仪器厂产DYY-Ⅱ1型。所有试剂均为分析纯。
结果
1. CYPIA1 3种基因型在食管癌病例、对照组Ⅰ、对照组Ⅱ中的分布情况见表1，三者分布差异有显著性(P<0.01)。因为2个对照组分布无差异(P=0.365)，合并分析。
2. CYPIA1基因型分布按吸烟与否分层分析（表2）。结果显示，只有A型中，病例组的吸烟率明
表1 CYPIA1基因型在食管癌病例组和对照组中的分布例数
CYPIA1基因型 病例组 对照组Ⅰ 对照组Ⅱ
A型 31 (27.9)
25 (56.8)
34 (48.6)
B型 41 (36.9) 12 (27.3) 28 (40.0)
C型 39 (35.2) 7 (15.9) 8 (11.4)
合计 111(100.0) 44(100.0) 70(100.0)
括号内为构成比(%)
表2 食管癌患者与对照组CYPIA1基因型分布与吸烟的分层分析
项目 A型(例) B型(例) C型(例) χ2值 P值
病例 对照 病例 对照 病例 对照
吸烟组 23 30 23 15 26 7 10.60 0.005
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