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重型肝炎时中性粒细胞的形态改变 |
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者肝衰竭程度及是否伴有严重并发症分早期和极期各10例进行观察。以本院健康献血员为正常对照组，共15例，男10例，女5例，平均年龄34.3岁。
2.电镜标本的制备：取静脉血4.5mL，0.13mol/L枸橼酸钠抗凝，以100×g离心5min，于所分离的血浆中缓慢加入0.03mol/L戊二醛0.2mL，常温放置5min。再以1000×g离心10min，弃上清，沿试管壁加入0.3mol/L戊二醛缓冲液2mL，常温下固定5h。轻轻拔出试管内的有核细胞层，用0.1 mol/L磷酸缓冲液冲洗，将所得标本修成1.5mm×1.5mm×1.5mm的小块，置0.3mol/L戊二醛内4℃下固定3h。以0.039mol/L锇酸作后固定，醋酸铀块染，系列丙酮脱水，环氧树脂618包埋，半薄切片HE染色后光镜下选择粒细胞层准确定位，制超薄切片两铝染色，H-300型透射电镜下观察。
3.核面积测量：于3000倍下随机对中性粒细胞摄片，置S-600型图像处理系统(重庆大学研制)进行核面积测量，每例随机连续测50个细胞核，取均值为其核面积代表值，用t检验处理数据。
4.线粒体、细胞颗粒计数：在电镜下直接随机连续计数50个中性粒细胞内线粒体(完全空化者不计数)、致密颗粒和低密度颗粒数，亦取均值为每例患者各项计数的代表值，同上方法统计处理。
结 果
一、超微结构观察结果(图1)。
Fig 1 The ultrastructural abnormalities of neutrophils in patients with severe hepatitis
1.The number of mitochondria, phagosome and granules of neutrophil decreased significantly.2.A significant swelling of mitochondria appeared in neutrophil. 3.The nucleus condensation of neutrophils was widely seen in extreme stage. 4.Endoplasmic reticula of neutrophil became dilated and some appeared degeneration
图1 重型肝炎患者中性粒细胞的超微结构改变
观察发现20例患者中性粒细胞均有明显的超微结构异常，以极期患者最为显著，早期患者次之。与正常对照组相比大致有以下几类变化：(1)粒细胞表面突起及伪足普遍减少，且不规则，其内所含胞质稀少，少见吞噬泡存在。极期及部分早期患者细胞形态和大小欠均一，易见质膜和胞浆的较多部分外突而使细胞呈畸形，一些极期患者的细胞质膜有局限性模糊不清和缺损现象。(2)粒细胞胞浆均有不同程度改变，一些为胞质密度不均匀，部分胞质溶解、空化和呈凝固状。多数为整个细胞胞质疏松、水肿变性，部分细胞胞浆内出现大小不等、数目多寡不一的空泡。胞浆内所含细胞器明显减少，吞噬泡、低密度颗粒、致密颗粒等均显著减少，严重者胞浆内仅见到2～3个细胞颗粒。(3)粒细胞线粒体改变颇为突出。其数量显著减少，极期患者线粒体完全缺失现象多见。残留线粒体呈不同程度的退行性改变，包括灶性肿胀、嵴断裂、高度水肿及空泡化，部分空泡变的线粒体内见髓鞘样结构。(4)极期及多数早期患者粒细胞核浆比例下降，呈明显的核浓缩，部分甚至呈核固缩，染色质亦显著浓缩，电子密度极度，伴有核周间隙消失等改变。(5)粒细胞内的膜性管道系统变化不一 。有些患者细胞内微管数量增多，呈灶性聚集。有些内质网高度扩张，内含均一的细颗粒状物质，部分甚至扩张成大空泡，并伴膜结构的溶解消失和较多的髓鞘样结构。
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