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抗肿瘤药对膀胱癌细胞产生的免疫抑制因子作用的影响 |
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杨莉 汪少娟 杨业金 陈忠 吴燕丽
摘 要 为探索抗肿瘤药对膀胱癌细胞产生的免疫抑制因 子(TDSF)对肿瘤“免疫逃逸”病理生理过程的影响， 采用免疫生化共育实验的方法， 取得 膀胱癌细胞产生的免疫抑制因子作用于人外周血单个核细胞(PBMC)6 h， 即可抑制白细胞介 素-2(IL-2)产生， 与对照组相比经统计学处理P＜0.01。 当TDSF存在时， 经激活 的PBMC效应细胞对外源性IL-2反应显著减弱， 表明IL-2的作用受到TDSF的抑制。 植物 血凝素-P(PHA-P)刺激PBMC增殖， 但TDSF使其增殖抑制。 表明IL-2产生及其作用受到TD SF抑制。 抗肿瘤药对TDSF的分泌有阻抑作用。
关键词 白细胞介素-2 膀胱癌细胞 肿瘤免疫抑制因子
恶性肿瘤在其生长过程中， 能产生一系列生物学和免疫学效应， 造成宿主 的免疫抑制， 以保护其本身不受机体的攻击而继续生长， 这就是肿瘤免疫中的“免疫逃 逸”。 目前已知有多种因素参与， 其中肿瘤细胞分泌的免疫抑制因子(tumor-de rived immunosuppre ssiuve factor, TDSF)是构成免疫逃逸的重要因素之一。 近年来， 国内外通过基因工程生 产IL-2， 应用IL-2和IL-2/LAK细胞对肿瘤进行过继性免疫治疗， 日益受到人们的重视［1］。 而TDSF对淋巴细胞和IL-2的抑制作用是治疗中必须解 决的问题之一。 为此 ， 我们探讨抗肿瘤药对膀胱癌细胞产生的TDSF的作用， 据此认识抗肿瘤药对肿瘤免疫逃逸 病理生理过程的影响。
1 材料与方法
1.1 细胞株和血清标本
BIU-87人膀胱癌细胞， 2BS正常人胚肺细胞； 膀胱癌9例， 献血员血清标本9份。
1.2 活性上清液的收集
10%新生小牛血清RPMI 1 640培养液调细胞 密 度至2×105/mL， 置37℃、 5% CO2孵箱培养细胞达(1～2)×106/mL时， 1 500 r pm离心10 min， 收获上清液， 0.22μm膜过滤后， 分装保存-20℃待测。
1.3 IL-2的诱生条件
用1∶10稀释的瘤细胞培养上清液与PBMC在37℃、 5% CO2中共同温育6 h， Hands液洗3次以清除残存的上清液， 再将此细胞与PHA在37 ℃、 5% CO2培养48 h， 同时设正常对照， 诱生IL-2。
1.4 效应细胞的驯化
用淋巴细胞分层液梯度离心获取PBMC 1×106 mL 培养于RPMI 1 640完全培养液中， 加入PHA-P10μ g/mL， 置37℃、 5% CO2中激活96 h， 此时， 大多数T细胞已转化成T淋 巴母细胞， 再用淋巴细胞分层液在100 g离心20 min， 收取淋巴母细胞， 即为IL-2的效 应细胞。
1.5 IL-2反应性的检测
用2%人血清 RPMI 1 640完全培养液 调效应细胞为2 ×105/mL， 每孔100 μL种于96孔板中， 再加1∶10稀释的瘤细胞培养上清液 及含有IL-2的条件培养液各50 μL， 同时设正常培养液及PHA对照， 37℃、 5% CO2 中培养64 h， 分别加入3H-TdR 0.5 μci/孔， 继续培养至72 h， 用多导细胞收集器 将细胞收集于玻璃纤维滤纸上， 烘干后， 同时设空白管和本底管， 用液体闪烁计数器测 定CPM值。
1.6 PHA对淋巴细胞激活作用的测定
1×106 mLPBMC和RPMI 1 640完全 培养液中种于96孔板中， 每孔100 μL， 加入PHA-P10 μg/mL， 100 μL 1∶1 0稀释的瘤细胞培养上清液(或膀胱癌病人血清)， 以正常2BS人胚肺细胞培养上清液(或正常 人血清)作对照。 培养72 h， 同上进行3H-TdR掺入测定和计算抑制率。
1.7 抗癌药对BIU-87细胞分泌TDSF的影响
用RPMI 1 640完全培养液调 细胞密度至2×105/mL， 分别加入丝裂霉素(MMC)10 μg/mL， 5-氟 脲嘧啶(5-FU)50 μg/mL， 同时设正常对照， 置37、 5% CO2中培养60 min ， Hanks液洗3次[1] [2] 下一页
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