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用银染法测定人睫状神经营养因子基因的核苷酸序列 |
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胡向阳 黄晓明 高翼之
【摘要】 目的 介绍一种采用银染法的非同位素DNA序列分析技术。方法 用Taq
DNA聚合酶扩增DNA模板进行测序反应，在测序反应中不使用任何标记，测序凝胶上的
DNA条带直接用灵敏的银染法检出。结果 用银染法测定了人睫状神经营养因子基因的
核苷酸序列，得到的DNA测序图谱与同位素相近，但全部结果可在测序反应后2小时内
得到。结论 银染法是一种十分经济方便并且快速可行的DNA测序方法。
【关键词】 DNA序列分析 银染法 人睫状神经营养因子
DNA SEQUENCING OF HUMAN CILLIARY NEUROTROPIC FACTOR GENE BY
SILVER STAINING METHOD Hu Xiangyang*,Huang Xiaoming,Gao Yizhi.*Institute of
Medical Sciences,Nanjing Railway Medical College,Nanjing，210009
【Abstract】 Objective To introduce a non-radioactive protocol for DNA sequence analysis
which employs a silver staining procedure Methods DNA template is amplified by Taq DNA polymerase
to generate sequence ladder,No labeled nucleotide or primer is involved in the thermal-cycling sequencing
reaction.A sensitive silver staining procedure is employed to visualize bands in sequencing gel.Results
This silver staining method is used for DNA sequence analysis of human cilliary neurotrophic factor(hCNTF)
gene.The resulted band resolution is comparable to radioactive sequencing method,and data can be
obtained with in less than 2 hours after sequencing reaction.Conclusion Silver staining is a rapid,inexpensive
and reliable method for DNA sequence analysis.
【Key words】 DNA sequence analysis Silver staining Human cilliary neurotropic factor
DNA序列分析是分子生物学研究中的一项十分重要的技术，该技术一般均需在DNA
聚合酶测序反应中使用放射性同位素(如32P或35S)标记，然后通过测序凝胶的放射自
显影，得到核苷酸序列图谱［1］。尽管在全自动DNA序列分析仪上可使用荧光素等非
同位素标记引物进行测序，但这类仪器十分昂贵，一般实验室无法普遍采用。我们利
用Taq DNA聚合酶循环测序法对已克隆的人睫状神经营养因子(hCNTF)基因进行了非同
位素DNA序列分析。在整个测序反应中不使用任何标记，测序胶上DNA条带通过银染法
直接检出，结果表明银染法是一种十分方便、快速和可行的DNA序列分析方法。现将该
方法介绍如下。
1 材料与方法
1.1 测序模板的制备 测序的DNA模板为我们自己克隆的人睫状神经营养因子(human
ciliary neurotrophic factor,hCNTF)基因，全长600bp，克隆进pGEM-5zf(+)载体(Promega
公司)多克隆位点的Nco Ⅰ和Sa1 Ⅰ酶切位点之间。为快速制备用作测序模板的质粒
DNA，采用Prom[1] [2] 下一页
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