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丙型肝炎疫苗研究现状及策略 |
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聂青和 综述 李梦东 审校
丙型肝炎病毒(HCV)感染有潜在的致肝硬化和肝癌的危险。约60%的急性丙型肝炎(HC)患者转化为慢性〔1〕。到目前为止，尚未发现令人满意的治疗药物。因此，HCV感染的防治工作更应以预防为主，这样HCV疫苗的研究就成为当务之急的前沿课题，但是HCV的体外培养分离尚未成功，HCV病毒蛋白仍很难从培养和血清中分离获得，用传统的方法制备疫苗是不可能的；而且尚未找到HCV保护性中和抗体，少数有关HCV的中和抗体的报道，还需要进一步观察证实〔2〕。笔者就HCV疫苗的研究现状综述如下。
HCV E区基因的研究
HCV nt变异贯穿了整个基因组，但E区变异最大。HCV属黄病毒科，黄病毒和瘟病毒包膜蛋白诱导机体产生的抗体为保护性中和抗体〔3〕。所以，HCV E区基因及其编码的包膜糖蛋白，是HCV疫苗研究的重点和关键。HCV E区有两个高变区(HVR1，HVR2)，Kato等〔4〕对E1和E2区的40个克隆进行了序列分析，证明HCV-J和HCV-US同型不同株间nt的差异分别为12%～24%和8%～17%，HVR1变异高于HVR2，同一患者中可能有多种不同的变异体存在。HVR1氨基酸的突变具有累积性，在HVR1新的变异体出现2～3月后，可测到针对原HVR1的抗体，提示HVR1可能含有诱导机体产生中和抗体的抗原表位。目前发现E2 HVR含特异性抗体结合的线性表位，是一个快速突变的蛋白区。HC患者病情加重和E2 HVR的变异体出现相关。HCV E2 HVR变异体出现是机体免疫压力选择作用的结果，反过来新的变异体出现又使病毒逃逸了机体的免疫监视〔5〕。最近Shimizu等人〔6〕应用HCV敏感的细胞系HPB-Ma进行HCV感染的体外阻断试验，证明了HCV感染者中有中和抗体的存在。但结果提示在HCV慢性感染中，HCV出现了新变异体，抗原性发生了改变。中和抗体仅能和最近的HCV株发生反应。
重组痘苗病毒载体表达的黄病毒和瘟病毒蛋白可诱导机体产生中和抗体〔3〕，所以重组痘苗病毒载体在表达HCV包膜糖蛋白中具有重要应用价值。Ralston等〔7〕用重组痘苗病毒载体转染哺乳动物细胞成功地表达了HCV结构蛋白，发现所表达的E1和E2包膜糖蛋白易形成复合物。用纯化的包膜糖蛋白E1 E2复合物免疫黑猩猩可产生高滴度的抗E1和抗E2抗体。而应用E1包膜糖蛋白仅能刺激机体产生弱的免疫反应，提示E1、E2包膜糖蛋白可能均是HCV疫苗的必需成分。
抗HCV感染的免疫力
HCV感染者易转化为慢性〔1〕，说明大多数HCV感染者缺乏足够的免疫力，不能清除体内病毒，易成为持续性感染者。最近香港学者报告在急性散发性肝炎的病原学中HCV感染极为罕
见〔8〕。说明HCV在人群中绝大多数以慢性感染的形式存在。90%～100%的HCV感染者均有抗
HCV-C、NS3和NS4抗体〔9〕。抗HCV阳性者HCV RNA阳性率高达80%～90%，高效价抗HCV及其持续性与病毒血症有关。感染HCV、抗HCV阳性的黑猩猩受到同源或异源HCV株攻击后，仍会再次发病〔10〕，这与早先发现的HC患者可能有多次复发的结果相似，说明感染HCV后机体的免疫力可能非常弱，甚至完全没有。感染HCV后缺乏足够免疫力的原因可能是：①体内HCV病毒量很低，一般＜103CID/ml，可能没有足够的免疫原刺激产生稳定的免疫保护力；②HCV RNA和病毒蛋白变异性很大，至少存在6个基因型和3个血清型〔11〕，彼此间可能没有交叉保护力；③可能与免疫选择和进化有关的HCV E区基因变异较大，很容易形成免疫逃逸突变株。世界各地分离的部分HCV株E基因的变异率高达20%～40%，甚至抗HCV-E抗体之间也没有交叉免疫反应，这是疫苗研制的一个重要障碍。
HCV疫苗的现状及研究策略
1993年底美国Chiron公司的Choo等〔12〕报告用重组痘苗病毒载体，在HeLa细胞中表达HCV包膜糖蛋白E1和E2，加佐剂制成HCV疫苗。在0、1、7月份对7只黑猩猩进行免疫，均产生了抗E1、抗E2抗体，而且效价高于慢性HCV感染者，在最后1次加强免疫后2～3周，用约10个CID50的HCV静脉攻击动物，7只中只有5只获得了完全性保护，而对照组5只黑猩猩均发生了HCV感染。这表明应用疫苗预防HCV感染有效，另两只抗HCV-E抗体效价＜15 000的黑猩猩一过性感染了HCV，表现为血清HCV RNA短暂阳性和丙氨酸转氨酶值一过性升高，但没有转化为慢性。正如Koziel〔13〕[1] [2] 下一页
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