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应用包埋前免疫胶体金直接法研究细胞内病毒抗原超微定位 |
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李向群 毛琳 文莉 肖红 杨占秋
摘 要 目的：探讨细胞内病毒抗原的超微定位的方法。方法：采用包埋前免疫胶体金方法标记I型单纯疱疹病毒(HSV-1)抗原以研究该病毒在人胚肺细胞(HEL)内的超微定位。结果：发现金颗粒约为5 nm，大小均一，在HSV-1囊膜、内质网膜表面及其邻近区域有大量的金颗粒，而阴性对照在这些地方未见金颗粒。结论：表明包埋前免疫胶体金方法可靠，可用于病毒抗原的超微定位研究。
关键词 包埋前免疫胶体金技术 免疫电镜 I型单纯疱疹病毒 病毒抗原
中国图书分类号 R392-33
The application of preembedding direct immunogold for ultrastructual localization of intracellular antigens of HSV-1
LI Xiang-Qun,MAO Lin,WEN Li et al.
Department of Clinical Virology,Institute of Virology Research,Hubei Medical University,Wuhan 430071
Abstract Objective:In order to explore the method for ultrastructual localization of viral intracellular antigens.Methods:The authors established a preembedding direct immunogold method to study the localization of HSV-1 antigens in human embryo lung cell.Results:The immunmoeletronic microscopy show that a lot of SPA-gold particles (diameter about 5 nm)exist in the membrance of HSV-1 envelope and endoplasmic reticulum and the areas adjacent to them ,but no SPA-gold particules exist in the same areas.Conclusion:Those results suggest that the preembedding direct immunogold method is reliable and can be used for ultrastructual localization of viral antigens.
Key words Preembedding immunogold technique Immunoelectronic microscopy Herpes simplex virus type I Viral antigens
细胞内病毒抗原的定位及检测，不仅可用于病毒鉴定，而且是研究病毒形态发生及病毒致病机理的重要手段，细胞内病毒抗原的定位以往多用免疫荧光法(IF)和过氧化物-抗过氧化物酶法(PAP)。前者不能用于细胞内抗原的超微定位；后者虽能，但由于有显色剂电子密度低在电镜下阳性显色不易与正常细胞结构区别等缺点。为克服上述方法的不足，我们建立了包埋前免疫胶体金直接法标记细胞内病毒抗原方法，且成功地应用于研究I型单纯疱疹病毒抗原的超微定位。
1 材料与方法
1.1 细胞与病毒
1.1.1 人胚肺细胞(HEL) 人胚肺取自人工引产4个月胚胎，按常规制备传代HEL细胞。
1.1.2 I型单纯疱疹病毒SM44株(HSV-1 SM44) 由美国耶鲁大学医学院熊菊贞教授惠赠。
1.2 氯化金(HAuCl4) 上海试剂一厂产品，批号XK13-0010801064。
1.3 葡萄球菌A蛋白(SPA) 西德Boehringer公司，Cot NO.775177。
1.4 血清 从武汉市七医院产妇血清中筛选出HSV-1阴性血清和HSV-1阳性血清,其免疫荧光效价为1：640。
1.5 5 nm胶体金制备 按Romano方法制备［1］。
1.6 SPA胶体金复合物的制备、纯化和质量鉴定
1.6.1 SPA与胶体金结合的最适浓[1] [2] 下一页
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