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一株新轮状病毒引起河北省石家庄市成人腹泻爆发流行 |
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组RV中唯一能引起人类腹泻流行的病原体，80年代由ADRV引起的成人腹泻在我国许多省份都有过大的爆发流行，但自90年代初可能由于人群抗体水平的提高，由ADRV引起的腹泻有减少的趋势。
1997年4月在河北省石家庄市某高校发生一起成人急性腹泻的爆发流行，累积1 055名大学生发病。其病例主要集中在女生中间。这与污染二次供水的供水面相符，停止供应该污染二次供水后病例发生数锐减，直至消灭［2］。我们从30个急性腹泻病例标本中检出14例核酸片段迁移率完全一致的新轮状病毒，且未见其它带型的轮状病毒。提示该轮状病毒是引起此次腹泻爆发的主要病原。经RT-PCR扩增进一步证明该病毒与引起我国成人腹泻多次大流行的ADRV是完全不同的毒株，且属于不同的组别，现将结果报告如下。
材料和方法
一、标本来源：1997年4月10～28日，河北省石家庄市某高校发生一起因二次供水污染而引起的成人急性腹泻爆发流行，共有1 055名大学生发病。其中90%病例是女生，男生病例只占10%，这是由于被污染的水源在女生宿舍及其食堂，只有少部分男生来此就餐。主要症状为发烧38～40℃、厌食、腹部绞痛、恶心呕吐、水样便或稀便［2］。取流行高峰在校医院住院腹泻病人粪便标本，－20℃保存待检。成人腹泻轮状病毒ADRV标本为本室1986年采于唐山ADRV腹泻大流行病例［3］。
二、RNA电泳：不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色按常规，浓缩胶为5%，分离胶为10%，垂直凝胶板为15cm×13cm×0.1cm。
三、RT-PCR试验方法：逆转录酶(AMV)、Taq DNA聚合酶为Promega产品。ADRV主要结构蛋白VP6、VP7编码基因5，9末端引物参照文献报道的基因序列设计合成［6，7］。取经Gene Clean Kit纯化的ADRV dsRNA 4.0μl，ddH2O 5.5μl，二甲基亚砜(DMSO)1.0μl，引物2.0μl(100ng)，95℃2min，置42℃加等量2×反应混合液(2×RM：2×Taq Buffer，MgCl2 5mmol/L，dNTP 0.4mmol/L，牛血清白蛋白第五片段0.2μg/μl，AMV反转录酶6Units，Taq酶3Units)，42℃平衡10min，42℃逆转录30min后，直接进入PCR循环，程序是94℃2min、55℃1min、70℃4min 25个循环，最后一循环72℃延至10min。反应结束后，用1.0%琼脂糖凝胶电泳检查。
结 果
一、病毒基因组特征：经不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳对照比较，新轮状病毒与A组或C组显然不同，与ADRV的迁移率也差别较大，新轮状病毒11条RNA核酸带与ADRV的具体区别是：①新轮状病毒除第2条核酸带以外其它十条的迁移速率都较ADRV对应的条带慢；②第一组4个基因片段呈均匀分布，而ADRV第一组4条带中3-4带呈双联带(图1)。
图1 粪便标本中轮状病毒基因组的不连续
聚丙烯酰胺凝胶电泳图结果
A：原成人轮状病毒ADRV RNA
B：此次腹泻爆发流行腹泻标本中的轮状病毒RNA
二、RT-PCR试验结果：取强阳性粪便标本，提取病毒RNA，采用Gene Clean Kit纯化后，用上述ADRV第5和9基因末端引物进行RT-PCR试验，致本次腹泻流行的新RV标本结果均为阴性，而ADRV阳性对照标本结果均为阳性(图2)。
图2 1.0%琼脂糖凝胶(EB染色)示粪便标本中
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