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转基因细胞系CHL |
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陈巧芳1 吴健敏2 余应年2
【摘要】 目的 建立CHL-3A4细胞系为某些遗传毒性化合物的代谢途径研究提供模型细胞系，并用于新合成化学物质的致突变性检测。方法 应用RT-PCR和DNA重组技术从人肝组织中克隆细胞色素P4503A4基因的cDNA至Bluescript M13-载体上，经限制性内切酶图谱分析和克隆片段部分序列测定，证实为CYP3A4 cDNA。然后构建真核细胞重组表达质粒pREP9-3A4，导入中国仓鼠CHL细胞。结果 建立了CHL-3A4转基因细胞系，双核细胞微核试验证明该细胞系能代谢活化黄曲霉毒素B1（AFB1）、 杂色霉菌毒素(STC)、 环磷酰胺(CPA)。结论 所建CHL-3A4细胞系确实能表达人细胞色素P4503A4,并能代谢活化AFB1、STC、CPA。
【关键词】 细胞系，转化
Establishment of Transgenic Cell Line CHL-3A4 and Its Metabolic Activation
Chen Qiaofang*, Wu Jianmin, Yu Yingnian.\*Institute for Hematology, The First Hospital Affiliated to Zhejiang Medical University, Hangzhou 310003
【Abstract】 Objective To establish a model cell line CHL-3A4 to study metabolic pathways for some genotoxic chemicals. Methods Complimentary DNA (cDNA) of cloned cytochrome P450-3A4 gene in human liver tissue was transferred to Bluescript M13 vector with reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and DNA recombinant techniques. Restriction endonuclease map analysis and sequencing of partial cloned fragment proved that CYP3A4 cDNA was cloned into Bluescript M13 vector. Then, recombinant expression plasmid pREP9-3A4 was constructed in eukaryotic cell and transfected into Chinese hamster CHL cells. Results It was proved that a CHL-3A4 transgenic cell line was established, which could lead metabolic activation for aflatoxin B1 (AFB1), sterigmatocystin (STC) and cyclophosphamide (CPA). Conclusion The CHL-3A4 cell line established did express human cytochrome P450 3A4 and could lead metabolic activation for three genotoxic chemicals AFB1, STC and CPA.
【Key words】 Cell line, transformed
细胞色素P450（CYP）是一类含血红素的酶，在哺乳动物中，这个超家族酶系由12个家族组成，分布于肺、肝、肾等不同器官。这类酶不仅能代谢许多内源性化合物(如甾体类激素、胆汁酸、脂肪酸、前列腺素等)，而且参与许多外来化学物质(如药物、毒物、前致突变物/致癌物等)的代谢。其中CYP1、CYP2、CYP3这3个家族的许多酶可代谢活化前致突变物／致癌物，生成带有亲电子基团产物，攻击DNA形成加成物。CYP3A4不仅可代谢活化前致癌物/致突变物，而且在许多药物的代谢中起重要作用。本实验完成的转基因细胞系将为研究前致突变物/致癌物的代谢、CYP3A4对药物的代谢作用提供了较为理想的模型。
材料与方法[1] [2] 下一页
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