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应用原位杂交技术检测人肝组织中输血传播病毒核酸 |
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李伯安 程云 王利平 李靖 高蓉 赵景民 王松山 张敏 罗清华
【摘要】 目的 探讨输血传播病毒(transfusion transmitted virus,TTV)在人肝组织中的分布状况及其意义。方法 采用地高辛标记探针，对肝组织中的TTV基因进行原位杂交定位检测。结果 原位杂交染色阳性者为细胞核团块状。5例正常人中有1例阳性，5例乙型肝炎患者有3例阳性，4例丙型肝炎患者有2例阳性，3例戊型肝炎患者有1例阳性。结论 TTV可感染肝细胞并在肝细胞核内复制。正常人及不同型肝炎病人的肝细胞内均可感染TTV。
【关键词】 输血传播病毒 肝组织 原位杂交
Detection of TTV DNA in liver tissue by in situ hybridization
LI Boan,CHENG Yun,WANG Liping, et al.
Department of Immunology,302 Hospital of PLA,Beijing 100039
【Abstract】 Objective To probe the distribution of transfusion transmitted virus (TTV) in liver tissiue.Methods TTV gene was detected in liver tissiue by situ-hybridization using digoxiginin-labeled probes. Results TTV genes detection by in situ-hybridization are massing in nucleoli of liver cells. It was detected in liver tissiue from 1 of 5 healthy individuals, 3 out of 5 patients with hepatitis B, 2 out of 4 patients with hepatitis C, 1 out of 3 patients with hepatitis E. Conclusion The data suggested that TTV infection is existed in general population and in patients with different types of hepatitis. The virus can replicate in nucleolus of liver cells.
【Key words】 TTV Liver tissiues In situ hybrdization
除甲～庚型肝炎病毒［1］外，仍有3.5%～15.0%的肝炎病人无法进行病原学分型。1997年12月Nishizawa等［2］首次从1例不明原因的输血后肝炎病人血清中分离到1种新的肝炎相关病毒基因，被暂命名为输血传播病毒(transfusion transmitted virus,TTV)。我们采用巢式聚合酶链反应(PCR)对北京地区的正常人群和各型肝炎病人进行了TTV DNA检测，并对其中1株TTV PCR产物进行了序列测定，其与日本报道的TTV的同源性为96.0%，证明为TTV。尔后我们采用原位杂交技术对正常人群和各型肝炎病人的肝组织中TTV DNA进行了检测，以探讨其在肝组织中的分布状况及意义。
材料与方法
一、病例选择及临床资料：随机选取北京第302医院1995～1996年进行肝脏穿刺取活检标本的17例病人，其中男性11例，女性6例，年龄18～63岁，平均为37岁。诊断标准采用第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修订标准(北京)，其中乙型肝炎5例，丙型肝炎4例，戊型肝炎3例。5例的正常肝组织取自尸检标本，其中交通意外死亡4例，溺水死亡1例。肝活检组织标本用10%福尔马林固定后，常规石蜡包埋。
二、探针制备：根据Okamoto等［3］报道的TTV基因序列设计引物，应用PCR技术由TTV感染患者血清中分离TTV部分基因片段，并经核苷酸序列测定与日本株同源性为96.0%，再用地高辛试剂盒(购自德国Boehringger Mannheim公司)按说明书标记探针。
三、原位杂交：石蜡切片经68℃烘烤3小时，二甲苯、乙醇梯度至0.1%DEPC液，依次加入PBS-Mg、0.[1] [2] 下一页
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