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伯氏疏螺旋体外膜蛋白C基因在大肠杆菌中的表达 |
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佟玉品 毕胜利 冯方波 贾月萍
【摘要】 目的 体外表达伯氏疏螺旋体外膜蛋白C(OspC)，以制备基因工程重组抗原用于莱姆病血清学诊断研究。方法 应用聚合酶链反应技术和基因重组技术，从2个伯氏疏螺旋体中国分离株基因组DNA中扩增得到OspC基因，分别克隆到表达载体LKB2中，在大肠杆菌中进行表达。结果 以天然蛋白形式高效表达了OspC。扫描分析显示，表达的OspC相对分子质量均在23 000左右，表达量占菌体总蛋白的34%～50%。Western blot试验证明，重组OspC蛋白可与莱姆病患者血清发生特异性反应。结论 重组OspC的成功表达为制备新型莱姆病早期诊断试剂奠定了基础。
【关键词】 伯氏疏螺旋体 外膜蛋白 基因表达 聚合酶链反应
Expression of outer surface protein C of Borrelia burgdorferi in Escherichia coli
TONG Yupin, BI Shengli, FENG Fangbo, et al.
Department of Experimental Medicine, 261st Hospital of PLA. Beijing 100094
【Abstract】 Objective In order to express outer surface protein C(OspC) of Borrelia burgdorferi in vitro and make research on the serodiagnosis of Lime disease with recombinant protein. Methods OspC gene, amplified from two Chinese isolates of Borrelia burgdorferi, were cloned into an expression vector LKB2 respectively. Two expressed vectors BT-OspC and BJ-OspC were constructed and then expressed in E.coli. Results OspC proteins were expressed heavily in a nonfused form which weighted 23 000 and accounted for 34%～50% of total bacterial protein. Western blot analysis showed that the expressed protein could be specifically recognized by the sera from patients with Lyme disease. Conclusion The successful expression of recombinant OspC protein makes a foundation for developing early diagnostic agents for Lyme disease.
【Key words】 Borrelia burgdorferi Outer membrane protein Gene expression Polymerase chain reaction
莱姆病是一种蜱媒疫源性疾病，在某些地区及特殊群体中感染率及发病率较高［1］。但目前国内尚缺少敏感、特异的诊断方法，以做到早期诊断、及时治疗。伯氏疏螺旋体(Borrelia Burgdorferi)是莱姆病的致病病原体，其外膜蛋白有较强的抗原性，国外研究报道，外膜蛋白C(OspC)具有很强的免疫原性，机体在感染早期可产生特异性IgM抗体，应用纯化抗原免疫动物，在实验动物感染后很短时间即可检测到高滴度的IgM抗体，重组OspC已用于莱姆病的血清学诊断［2，3］。为了进一步研究伯氏疏螺旋体中国分离株OspC的免疫原性，我们从2个国内分离株中扩增出OspC基因，插入表达载体LKB2，并在大肠杆菌中进行表达，以期制备基因工程重组抗原，应用于伯氏疏螺旋体OspC的抗原性和免疫原性研究及莱姆病的早期血清学诊断。
材料与方法
一、菌株培养及基因组DNA制备
伯氏疏螺旋体分离株BT01为北京西山地区长角血蜱分离株，[1] [2] 下一页
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