化橘红多糖对小鼠免疫调节功能的研究

马  超1，江明树2

（茂名学院，1教评中心，2化学与生命科学学院， 广东 茂名 52500）

摘  要：提取的化橘红多糖（ECP）分别对小鼠进行特异免疫性及非特异性免疫调节测定进行。结果表明：化橘红多糖对小鼠的特异性和非特异性都有着极显著的免疫增强作用。
关键词：化橘红；多糖；免疫调节活性

化橘红(Exocarpium citri grandis,ECG)是广东名贵中药材,为芸香科植物化州柚(citrugrandis Tomentosa )或柚(citrusgrandis(L.).Osbeck)的未成熟或近成熟的干燥外层果皮[21]。它是珍贵的中药材之一，具有治疗风寒咳嗽，肝胃气痛，祛痰止咳作用，对慢性支气管炎、慢性阻塞性肺炎具有良好疗效。化橘红多糖（Exocarpium Citri Grandis Polysaccharide，ECP）类化合物具有抗肿瘤和免疫增强的作用，一部分多糖类化合物已用于临床，并取得良好的效果。目前人们对化橘红多糖免疫调节功能的研究至今未见报道。本实验通过化橘红多糖对小鼠特异性及非特异性免疫活性进行了初步的研究，旨在为其质量控制、品质评定及开发利用提供科学依据，并为开发新型的化橘红多糖免疫增强类药物提供理论支持和参考依据。
1 材料与方法
1.1 材料  化橘红：本实验组老师从化州的化橘红采集得到。
作者简介：马超（1980-  ）男，安徽淮北人，硕士，助教，主要从事应用生物技术及相关领域的教学科研工作。Tel:0668-2923089，E-mail:[email protected]。
1.2 化橘红多糖对小鼠免疫功能的影响
1.2.1化橘红多糖对小鼠特异性免疫功能的影响
(1)．动物分组：动物随机分为正常对照组和3组ECP组，共四个不同的组，每组10只，ECP组每天分别给药50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg 。
(2).给药方法：ECP按剂量用生理盐水稀释后以0.5ml/20g喂食。对照组用生理盐水喂食，连续10d。
(3)．多糖对小鼠淋巴细胞转化的影响[29]
ECP组于给药前3d每鼠每天均肌注PHA10mg/kg，于第8d给药后2h，小鼠剪尾取血，涂片，瑞氏染色液染色，油镜观察，计算淋巴细胞转化率。
淋巴细胞转化率〔%〕=转化的淋巴细胞数琳巴细胞总数x 100
(4)．多糖对小鼠免疫器官的影响[30]
ECP组于给药后第七日，取出小鼠脾、肝、胸腺，除去鲜血，脂肪，组织膜。用电子天平称其湿重，后计算各指数。
    肝指数=肝的平均重量（mg）/平均体重（g）
    脾指数=脾的平均重量（mg）/平均体重（g）
    胸腺指数=胸腺的平均重量（mg）/平均体重（g）
(5)．多糖对小鼠溶血素形成的影响[28]
ECP组于第1天每鼠腹腔注射5%的鸡红细胞生理盐水液进行免疫，于给药后的第七日的2h后，眼眶取血，离心，血清用生理盐水1:100稀释后取10mL与5%鸡红细胞混悬液0.5mL和10%补体（豚鼠血清）0.5mL混匀，37℃ 孵育30min，冰水中止反应，上清液于N722分光光度计540nm比色，以不加补体为空白对照。
1.2.2化橘红多糖对小鼠非特异性免疫功能的影响
（1）动物分组：动物随机分为正常对照组和3组ECP组，共四个不同的组，每组10只，ECP组每天分别给药50 mg/kg，100 mg/kg，200 mg/kg 。
（2）给药方法：ECP按剂量用生理盐水稀释后以0.5ml/20g喂食。对照组用生理盐水喂食，连续10 d。
（3）多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响[26]
ECP组每天给药一次，连续七日，于最后一日早上每鼠口服5%的鸡红细胞生理盐水混凝液，于给鸡红细胞后3 h，最后一次给药后2 h，处死小鼠，消毒腹部，后注入生理盐水2.5mL，轻揉小鼠腹部，取腹腔液于玻片上，在玻片下辅湿沙布，37度孵育30 min，用生理盐水冲去浮着的细胞，瑞氏染色液染色，显微镜下观察，计算吞噬百分率和吞噬指数。
吞噬百分率(%)=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞/100个巨噬细胞(吞及末吞的)×100%；
吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞数/100个巨噬细胞。
1.3 统计学分析
用统计学进行计

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