);乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
广东药学院学报 第26卷 第4期 魏大华,等.小儿清热利肺口服液中总绿原酸的含量测定方法研究
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：DiamonsiLTM C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)柱;流动相：乙腈体积分数0.4% H3PO4水溶液(体积比10∶90);流速：1 mL·min-1;检测波长：327 nm;柱温：30 ℃;进样量：20 μL。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品(于室温用P2O5干燥24 h)8.14 mg，置20 mL棕色容量瓶中，加50%(体积分数)甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液。精密吸取绿原酸对照品贮备液2 mL置于25 mL容量瓶中，用50%(体积分数)甲醇稀释制成每1 mL含绿原酸 0.032 6 mg的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
精密吸取小儿清热利肺口服液1 mL至分液漏斗中，用水饱和正丁醇萃取4次，每次10 mL，合并正丁醇层于70 ℃水浴蒸干，残渣用50%(体积分数)甲醇溶解，定容至50 mL容量瓶中，摇匀，用0.45 μm微孔薄膜滤过，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备
称取处方组成中除金银花和牛蒡子外的其余药材，按照生产工艺制备阴性样品，并按“2. 3”项下方法制备，即得阴性对照溶液。
2.5 系统适用性试验
分别紧密吸取对照品、供试品、阴性对照溶液各20 μL注入液相色谱仪中，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。在此条件下，阴性对绿原酸测定无干扰，绿原酸和其他组分可达到基线分离，分离度R>5。理论塔板数以绿原酸计，应不低于 1 000。结果见图1。
2.6 线性关系考察
精密吸取“2.2”项下绿原酸对照品贮备液各1、2、3、4、5 mL，分别至25 mL棕色容量瓶中，加50%(体积分数)甲醇稀释至刻度，摇匀，得绿原酸质量浓度分别为16.28、32.56、48.84、65.12、81.4 μg·mL-1的系列对照品溶液。分别精密吸取20 μL进样，按“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积。以峰面积积分值(Y)为纵坐标，绿原酸对照品量(X，μg)为横坐标进行线性回归，求得回归方程为：
Y=6.2465×104X-3.6896×104，r=0.999 6。
结果表明,绿原酸在16.28～81.4 μg范围内，与峰面积呈良好线性关系。
2.7 精密度试验
精密吸取同一对照品溶液20 μL注入液相色谱仪，重复进样5次，按“2.1”项下色谱条件测定绿原酸峰面积，结果RSD值为1.51%(n=5)，表明仪器精密度良好。
2.8 稳定性试验
精密吸取同一供试品(批号E06002)溶液，于0、4、8、12、18、24 h分别进样，按“2.1”项下色谱条件测定，记录色谱峰面积。结果RSD值为1.60%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.9 重复性试验
取同一批号(批号F03002B)小儿清热利肺口服液6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定。结果绿原酸含量的RSD值为0.19%(n=6)，表明本方法重复性良好。
2.10 加样回收率试验
精密吸取小儿清热利肺口服液(批号I11002B)适当稀释后的药液共6份(绿原酸质量浓度为0.842 7 mg·mL-1)，分别加入绿原酸对照品溶液适量，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按照“2.1”项下方法测定绿原酸的含量，计算回收率。结果见表1。表1 加样回收率试验结果
2.11 样品测定
取小儿清热利肺口服液3批 (批号E06002、F03002B、F10001B)，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，以外标法计算绿原酸的含量。结果3个批号样品的质量浓度分别为2.331、1.861、1.928 mg·mL-1，RSD值依次为0.48%、1.09%和0.77%。
3 讨论
3.1 绿原酸为金银花的特征有效成分。本实验在去除金银花的阴性对照液中检测出较高含量的绿原酸(见图2)，并通过实验发现绿原酸在牛蒡子中含量较高。曾有关于在牛蒡叶中提取绿原酸的文献报道[3]，但未见牛蒡子中检测出绿原酸的报道。本研究这一发现不仅提高
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