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活化蛋白C抵抗与复发性流产关系的研究 |
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二、方法
1.标本处理：采集静脉血4.5 ml与0.129 mol/L的枸橼酸钠 0.5 ml按1∶9混合，采血30 min内在12℃条件下2 800 r/min离心15 min，取贫血小板血浆(离心前后的血浆进行血小板计数，保证离心后的血小板数低于离心前的1% )，每份1 ml,分装后储存于-70℃的冰箱中。
2.抗APC-R敏感比值 (APC-SR)的检测：以活化部分凝血活酶时间 (APTT)为基础［1］检测APC-R。用DIAGNOSTICS STAGO APC-R试剂盒（法国Assieres公司产品）在ACL-200全自动血液凝固仪上测定。具体实验方法如下：分别在试管1和试管2中加入100 μl APTT试剂与100 μl待测血浆，混合，37℃孵育30 min，试管 1中加入0.025 mol CaCl2缓冲液100 μl，测得APTT1，然后在试管2中加入含有0.025 mol CaCl2的活化蛋白C（APC）试剂，浓度为1 μg/ml，测得APTT2，并计算加入APC试剂前后的APC-SR， APC-SR=APTT2/APTT1。结果判断：APC-SR低于正常值的2 s以上为APC-R阳性。
三、统计学处理
APC-SR测定结果采用±s表示，组间均数用t检测，APC-R阳性率比较采用χ2检验。
结果
一、两组APC-SR均值及APC-R阳性率的比较
对照组的APC-SR均值为2.17±0.25(1.92～2.42)，按上述标准APC-SR低于1.67为APC-R阳性。对照组有2例APC-R阳性，阳性率为5%。实验组APC-SR均值为1.92±0.49(1.43～2.41),有14例为APC-R阳性，阳性率为26%。两组间APC-SR均值比较，差异有显著性（P<0.05）；两组间APC-R阳性率比较，差异有极显著性（P<0.01）。
二、不同流产次数者之间 APC-R阳性率的比较
有2次流产者的APC-SR均值为 2.01±0.48 (1.53～2.49)，7例为APC-R阳性，阳性率为23%。有 3次或 3次以上流产者的APC-SR均值为1.89±0.49(1.40～2.38)，7例为APC-R阳性，阳性率为 29%。两者阳性率比较，差异无显著性（P>0.05）。
三、不同流产时间APC-R阳性率的比较
早期流产者APC-SR均值为 2.07±0.42(1.65～2.49)，3例为APC-R阳性，阳性率为12%；晚期流产者APC-SR均值为1.89±0.51(1.36～2.38)，11例为APC-R阳性，阳性率为38%。两者之间阳性率比较，差异有显著性（P<0.05）。
讨论
人体正常抗凝系统中，APC通过水解活化凝血因子Ⅴ和凝血因子Ⅷ使之灭活而发挥抗凝作用，其体外抗凝活性表现为加入APC后，受检者APTT显著延长。Dahlback等［1］报道，在一些血栓病患者中，加入纯化的APC并未使APTT延长，这种现象被称为APC-R现象。APC-R是由于凝血因子Ⅴ基因上1 691位的鸟嘌呤被腺嘌呤代替，引起凝血因子Ⅴ氨基酸序列506位精氨酸被谷氨酸置换［2］，使活化凝血因子Ⅴ对APC反应降低。除了遗传性APC-R外，现在还发现存在获得性APC-R，抗磷脂抗体的产生是获得性PAC-R的重要原因［3］。
APC-R在流产中的作用，在国外已受到关注。 在一些原因不明的妊娠丢失患者中，APC-R阳性患者与APC-R阴性患者相比，晚期流产发生率明显增高，活产率明显下降，而早期流产发生无明显差异［4］。 Rai等［5］则发现，发生于第2孕期流产者APC-R阳性率为20%，仅有第1孕期流产者APC-R阳性率为5.7%，正常对照组为4.3%。本研究中，复发性流产与对照组之间APGR阳性率有明显差异，其中晚期流产者明显高于早期流产者。提示， APC-R与复发性流产特别是晚期流产有一定联系。
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