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滋养细胞肿瘤组织中端粒酶RNA基因的表达及其意义 |
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郑伟 石一复 谢幸
端粒是真核生物细胞染色体末端的一种特殊结构，含有许多简单重复的DNA序列及相关蛋白质。端粒缩短被认为是正常细胞分裂与老化的分子信号。端粒酶是一种核糖核蛋白，主要由RNA和蛋白质组成, 它阻止端粒的丢失,使细胞发展成为永生化细胞或无限增殖的癌细胞［1］。本研究采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测了43例正常胎盘组织和35例滋养细胞肿瘤组织中人端粒酶RNA(hTR)基因的表达并探讨其意义。现报道如下。
一、 资料与方法
1. 研究对象：43例人胎盘绒毛组织和35例滋养细胞肿瘤组织均取自浙江大学医学院附属妇产科医院，其中早孕绒毛21例，取自早孕（孕8～12周）行人工流产终止妊娠者；足月妊娠胎盘组织22例；葡萄胎组织12例，取自葡萄胎住院患者首次刮宫术时；侵蚀性葡萄胎14例及绒癌组织9例，均取材于手术切除的子宫病灶。所有标本均经组织病理学检查确诊。
2. PCR引物: hTR基因上游引物5′-GGGAGGGGTGGTGGCCATTT-3′和下游引物5′-GTTTGCTCTAGAATGAACGG-3′ 由中国科学院上海细胞生物学研究所合成。
3. hTR基因的RT-PCR扩增：常规方法提取组织和细胞中的RNA，并采用BECKMAN DU-6000紫外分光光度仪测定其含量。在提取的RNA中吸取液体4 μl，依次加入逆转录酶及DNA聚合酶混合液0.5 μl、PCR缓冲液10 μl和RT-PCR反应液16 μl、上游引物2 μl、下游引物2 μl 和内参照引物4 μl，42℃保温30分钟。逆转录产物按下列条件进行PCR扩增，变性94℃ 30秒；退火58℃ 30秒；延伸72℃30秒,循环40次。RT-PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳。经凝胶成像分析系统拍照并采用Phosphor An/PC软件进行半定量分析。
4.统计学分析：采用t检验。
二、结果
采用hTR组分的特异性引物, 对人胎盘和滋养细胞肿瘤组织中的hTR基因进行RT-PCR扩增，结果显示，正常早孕绒毛hTR基因呈阳性，足月胎盘绒毛hTR基因呈阴性或弱阳性，葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌组织均呈强阳性。 早孕绒毛组织hTR基因/β-肌动蛋白(β-actin)显著高于足月妊娠绒毛组织hTR基因/β-actin(P<0.05), 滋养细胞肿瘤组织hTR基因/β-actin显著高于早孕绒毛(P <0.01)和足月胎盘绒毛组织(P<0.001)。见表1。
表1 人胎盘和滋养细胞肿瘤
的hTR基因/β-actin相对水平（±s）
类 别 例数 hTR基因/β-actin
早孕绒毛 21 0.6±0.24*
足月胎盘绒毛 22 0.08±0.05
滋养细胞肿瘤 35 1.75±0.15**
* 与足月妊娠胎盘绒毛比较， P<0.05
** 与正常早孕绒毛、足月胎盘绒毛比
较，P<0.01
三、讨论
滋养细胞肿瘤绝大多数继发于正常或不正常妊娠，除具有一般肿瘤的特点外，尚具有其本身的特点，即来源于胚胎滋养层，具有向母体子宫内膜侵入的特征，但也有许多不同于恶性肿瘤的特点。近年来的研究表明，在正常早期妊娠的滋养细胞中，也发现某些癌基因如myc、ras和p53 基因的表达，但在足月妊娠的胎盘中则无表达，早期妊娠滋养细胞中的原癌基因和抑癌基因的过度表达，可能与其细胞增殖生长的需要有关。随着妊娠的进展，胎盘滋养层的生长和发育，许多癌基因表达均有下降［2，3］。本研究中发现，在人正常早孕绒毛组织中也存在hTR基因的表达，但在足月妊娠的胎盘中，hTR基因呈低水平表达或不表达。由于正常细胞与恶性肿瘤细胞的生物学特性截然不同，前者呈寿命有限的自控生长，而后者则呈寿命无限的失控生长，故在正常早孕绒毛组织中hTR基因的表达与恶性滋养细胞肿瘤hTR基因的表达之间存在一定的内在差异。hTR基因的表达可能参与滋养细胞的分化与增殖，但其作用机理仍不清楚，尚待进一步研究。
本研究结果显示，在滋养细胞肿瘤中存在端粒酶的活性，尤其在恶性滋养细胞肿瘤组织中，hTR基因具有高水[1] [2] 下一页
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