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分光光度法测定刺五加茎中黄酮含量 |
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王丽英 宋玉萍 王淑珍
提要 以芦丁为对照品，采用分光光度法测定刺五加茎中黄酮含量。以甲醇为溶剂连续回流提取。回归方程为 A=9.4000 C－0.0320， γ=0.9998( n=5)样品平均回收率为98.77%， RSD为1.34%。
关键词 分光光度法； 刺五加茎； 含量
刺五加茎是五加科植物刺五加Acanthopanax senticosus (Rupr.et Maxim) Harms的干燥茎。用分光光度法测定刺五加茎中黄酮含量，所得结果满意。
1 仪器与试剂
UV-7530紫外分光光度计(上海分析仪器厂)；其它试剂均为分析纯；刺五加茎为小兴安岭野生资源。芦丁对照品由中国药品生物检定所提供(批号：080-9303)
2 方法与结果
2.1 实验条件的选择
2.1.1 供试液制备：精密称取药材粉末2 g，置索氏提取器中，加100 ml石油醚脱脂2 h，再用90 ml甲醇提取4 h，置100 ml量瓶中，用甲醇定容，精密吸取25 ml置50 ml量瓶中用蒸馏水稀释至刻度，摇匀即得。
2.1.2 标准溶液制备：精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品约20 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇约80 ml，置水浴上微热溶解，放冷，加甲醇至刻度，精密量取25 ml置50 ml量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得芦丁对照液约0.1 mg/ml。
2.1.3 测定波长选择：精密量取芦丁对照液4 ml，置10 ml量瓶中，加5%NaNO2溶液0.3 ml，摇匀，放置6 min加10%Al(NO3)3溶液0.3 ml，摇匀，放置6 min加4%NaOH溶液4 ml，再用30%乙醇液稀释至刻度，摇匀，放置10 min置比色皿中在波长400～600 nm之间测定吸收谱，确定最大吸收波长为510 nm。
2.1.4 稳定性实验：精密量取芦丁对照液4 ml，置10 ml量瓶中，按2.1.3项从“加5%NaNO2溶液……再用30%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀”操作，于510 nm测定吸收度，然后每隔5 min测定吸收度，观察其吸收度变化情况，结果见表1，表明最佳测定时间为显色后5～25 min。
表1 稳定性实验结果
时间(min) 吸收度A
0 0.342
5 0.391
10 0.385
15 0.384
20 0.382
25 0.380
30 0.371
35 0.362
2.2 标准曲线制备：精密吸取芦丁对照液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分别置10 ml量瓶中，按2.1.3项从“加5%NaNO2溶液……放置10 min”操作，于510 nm测定吸收度，按浓度与吸收度相关关系求得回归方程为 A=9.4000 C－0.0320，γ=0.9998( n=5)显示在0.01～0.05 mg/ml浓度范围内线性关系良好。
2.3 精密度实验：精密量取芦丁对照液4 ml，5份，按2.2法操作，测定吸收度，计算 RSD=0.67%( n=5)。
2.4 样品测定：按2.1.1项操作制备样品液5份，精密吸取4 ml，置10 ml量瓶中，2份，一份用30%乙醇液稀释至刻度摇匀做空白液；另一份按2.2项方法操作，分别测定吸收度，通过△ A计算平均含量为11.36 mg/g，结果见表2。
表2 刺五加茎黄酮含量测定结果
样品号 含量(mg/g) 平均含量(mg/g) RSD(%)
1 11.45
2 11.27
3 11.33 11.36 0.82
4 11.46
5 11.27
2.5 加样回收实验：精密称取刺五加茎约1 g，5份，分别加芦丁对照品约10 mg，按2.4项操作测定吸收度，得样品平均加样回收率98.77%， RSD为1.34%，结果见表3。
表3 加样回收实验结果
样品号 样品折算
含量(mg) 加入对照
品量(mg) 测得量
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