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怀地黄多糖化学研究 |
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杨云 苗明三 王浴铭
提要 采用DEAE-Cellulose及Sephadex G-200柱层析，从怀地黄水提取物中分离出一多糖RG，醋酸纤维素薄膜电泳，高效凝胶渗透色谱证实，RG为单一组份，薄层层析和气相色谱分析表明，该多糖由葡萄糖、半乳糖、鼠李糖和甘露糖组成。
关键词 怀地黄；多糖；化学研究
Chemical Study on Polysaccharide Constituent of Rehmannia
Glutinosa Libosch. F. Huei Chinensis Hsiao
Yang Yun, Miao Mingsan, Wang Yuming
Henan College of TCM, Zhengzhou 450003
Abstract This paper reported the chemical study on polysaccaride constituent of Rehmannia Glutinosa Libosch. f. Huei chinensis Hsiao. From the water extracts of this traditional Chinese medicine, a polysaccaride, named RG, was isolated by DEAE-cellulose and Sephadex-200 column chromatography. The polysaccharide was homogeneous judged by HPGPC and acetate cellulose film electrophoresis. TLC and GC showed that RG was composed of glucose, galactose, rhamnose and mannose.
Key words Rehmannia Glutinosa;Polysaccharide;Chemical study
怀地黄(Rehmannia glutinosa Libosch. f. huei Chinensis Hsiao)系玄参科地黄属植物，为常用中药，也是河南地道药材之一。其炮制品熟地黄具有滋阴补肾、补血调经的功效，主要用于腰膝酸软、头晕耳鸣、肾虚等。在寻找地黄补益活性成分的研究中，我们发现其多糖具有提高正常小鼠淋巴细胞转化率，增重小鼠免疫器官(肝、脾)以及促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能等作用。因此，对多糖部分进行了进一步的分离纯化及初步化学研究。
1 仪器、药品及试剂
GPC测定仪为HP-1090M(带GPC软件)，示差折光仪为HP-1037A RI，柱为μ-Bondagel E-1000，均为美国惠普公司产品。GC仪为HP5890 Ⅱ型，OV-17弹性石英毛细管柱，3396积分仪。DEAE-Cellulose为whatman产品。Sephadex G-200为pharmacia产品。测定分子量所用标准品Shodex Standard Pullulan P-82系列为SHOWA DENICO K.K公司产品。醋酸纤维素薄膜为浙江黄岩曙光化工厂产品。各种单糖标准品为Merck出品。除乙醇为工业级外，其余溶剂均为分析纯。
2 多糖的提取分离
熟地，粉碎，乙醇渗漉至流出液浅黄色为止，药渣挥去乙醇，热水提取3次，滤液浓缩，加1%鞣酸至不再产生沉淀，煮沸15 min，加入20%活性炭搅拌10 min，抽滤，滤液逆向流水透析3 d，浓缩，调含醇量80%，滤取沉淀，以无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，P2O5干燥器干燥，得粗多糖。
取粗多糖进行DEAE-Cellulose柱层析，依次以H2O、0～2 mol/L NaCl溶液梯度洗脱，分部收集，苯酚－硫酸法检测，合并单一峰位，再经Sephadex G-200反复柱层析，洗脱剂及检测方法同前，结果得到一个单一组份，经蒸馏水透析，浓缩，醇沉，干燥，得地黄多糖RG。
3 纯度及分子量测定
3.1 纯度测定
3.1.1 醋酸纤维素膜电泳：醋酸纤维素膜(3 cm×10 cm)，硼砂缓冲液(pH9.2)。电压340 V，时间30 min，0.5%阿利新蓝的3%醋酸液显色，RG呈单一黄色色带。
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