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莱姆病螺旋体中国分离株外膜蛋白C基因的克隆与序列分析 |
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佟玉品 杨新科 冯方波 汪治清 周国萍
【摘要】 目的 了解引起我国莱姆病的伯氏疏螺旋体外膜蛋白C(OspC)基因变异情况。方法 应用聚合酶链反应从2株莱姆病螺旋体中国分离株BT01和BJ-9011全基因组DNA中将OspC基因调出，并插入质粒pGEM-3ZF(+)中，构建重组质粒pGEM-3ZF(+)－OspC，经Sanger双脱氧末端终止法测序，并将之与国外其它分离株进行同源性比较。结果 除信号肽序列外，2株莱姆病螺旋体分离株BT01和BJ-9011的OspC基因依次为579 bp和576bp，分别编码193和192氨基酸，两者核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为86%和83%，与国外分离株(PBi、PKo及B31)的同源性均较高，其中BJ-9011株与国际标准株B31株之间核苷酸及氨基酸同源性达99%。结论 伯氏疏螺旋体OspC基因在国内2个分离株之间存在一定差异，其与国外分离株之间也存在一定差异。
【关键词】 疏螺旋体，伯氏 膜蛋白类 基因 克隆，分子 序列分析
Molecular cloning and DNA sequencing of OspC gene of two strains Borrelia burgdorferi isolated in China Tong Yupin, Yang Xinke, Feng Fangbo, et al. Department of Experimental Medicine, 261 Hospital of PLA, Beijing 100094
【Abstract】 Objective To investigate the variation of OspC gene in two Chinese isolates of Borrelia burgdorferi.Methods PCR technique was used to amplify the OspC gene from the whole cellular DNA of isolates BT01 and BJ-9011. The amplified products were inserted into plasmid pGEM-3ZF(+) and sequenced. Results Except the signal peptide, the OspC genes of the two isolates BT01 and BJ-9011 were 579bp and 576bp which encode 193,192 amino acids respectively. The nucleotide and amino acids sequence identity between the two strains was 86% and 83%. High homology exists between these Chinese isolates and several foreign isolates (PBi, PKo, B31), especially in BJ-9011. It had 99% nucleotide and amino acid sequence identitfied with B31. Conclusion Variations in OspC genes are noted between the two Chinese Borrelia burgdorferi isolates and foreign isolates.
【Key words】 Borrelia burgdorferi Membrane proteins Genes Cloning, molecular Sequence analysis
(Natl Med J China, 1998, 78：551-553)
莱姆病螺旋体外膜蛋白C(OspC)是具有很强的抗原活性，纯化抗原及重组抗原已应用于莱姆病的早期诊断并在动物实验中发现其有免疫保护作用，可望成为疫苗研制的候选蛋白［1，2］。伯氏疏螺旋体株间变异较大，研究中需考虑其株间差异。我们参照国外文献报道的PKo株OspC基因序列，设计合成一对寡核苷酸引物，应用PCR技术从国内2株螺旋体中调出该基因，并进行克隆与序列测定。
材料与方法
1.菌株培养与基因组DNA制备：两株伯氏疏螺旋体BT01为北京西[1] [2] 下一页
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