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寻常型银屑病患者白细胞介素1受体拮抗剂基因多态性的研究

更新时间:2012-10-15 14:46:28  
刘贞富 张军民 杨琦 许彤华
(430022 武汉,同济医科大学附属协和医院皮肤科)

  在白细胞介素1(IL-1)α和β及IL-1的ra基因(统称为IL-1RN)编码区内含子2中有一个可变数目的重复序列[1],构成IL-1RN多态性。而其多态性在免疫介导的炎性疾病中可能有不同的功能意义。为了解IL-1RN多态性在寻常型银屑病患者中的可能作用,我们采用聚合酶链反应(PCR)方法研究了寻常型银屑病患者血中IL-1RN多态性,现将初步结果报道如下。
  一、对象和方法
  1.对象:82例寻常型银屑病患者来自本院门诊和住院处,其中男46例,女36例,年龄7~45岁,平均25.7岁,病程0.5~14年,平均3.9年。82例患者中斑块状银屑病47例,点滴状银屑病35例。正常对照为130例健康献血员。
  2.标本收集与处理:(1) 取被检查者静脉血2ml(依地酸抗凝)置塑料薄膜上干燥后备用;(2) 按文献[2]方法提取DNA模板和PCR。
  3.PCR引物和条件:实验室所用引物参照文献[3]的引物序列:5′CTCAGCAACACTCCTAT3′和5′TCCTGGTCTGCAGGTAA3′(引物为上海细胞生物所合成)。扩增条件为50 μl反应体系含DNA样品100 ng,4种dNTP各60μmol/L(华美公司),1U Tag DNA多聚酶(华美公司)引物各60 pmol/L,反应在小型热循环仪(美国泊金-埃尔默公司)中进行,90℃变性5分钟后进入循环,94℃1分钟,55℃1分钟,72℃2分钟35个循环后,72℃延伸5分钟。2%琼脂糖凝胶电泳检测产物,紫外灯下观察结果。
  4.统计学方法:(1) 基因频率显著性检验用四格表χ2检验;(2) 携带某基

附表 两组对象的基因型分布和频率(例数)


组别 例数 基因型 频率
1,2 1,2 2,2 1,3 A1 A2
正常对照组 130 72 44 8 6 0.75 0.23
寻常型银屑病组 82 29 30 20 3 0.55 0.43
斑块状 47 14 19 13 1 0.51 0.48
点滴状 35 15 11 7 2 0.61 0.36

的因疾病危险性用OR值估计相对危险度。
  二、结果
  1.两组对象基因型及分布:(1) 有3种等位基因产物410 bp,240 bp,500 bp,分别是IL-2RN调控区内含子2中86 bp序列的4、2及5个的重复,命名为A1(等位基因1)、A2(等位基因2)及A3(等位基因3);(2) 寻常型银屑病组A2频率较正常对照组高,其中以斑块状银屑病者增高更明显。A1频率在病例组中下降,以斑块状银屑病下降略明显。两组A3频率差异无显著意义。基因型和频率在寻常型银屑病组和对照组中分布见附表。
  2.病例组与正常对照组A2携带率:寻常型银屑病A2携带率为61%(其中斑块状银屑病可高达68%,高于正常对照组为40%,两组比较χ2=8.86,P<0.01),斑块状银屑病与正常对照组比χ2=10.91,P<0.001。
  3.携带A2者患寻常型银屑病的危险度:携带A2者寻常型银屑病发病率与携带A2者未发生寻常型银屑病数之比OR值为2.34,表明,携带A2者患寻常型银屑病的危险度是1.34~4.09(95%可信限)。
  三、讨论
  许多细胞因子基因包括肿瘤坏死因子(TNF)α,IL-1α和IL-1β都具有多态性[4]。IL-1 RN位于2号染色体长臂上。Tarlow等[3]应用PCR方法及对两侧引物间碱基测序证实IL-1ra基因内含子2具有多态性,其多态性是由内含子2中86bp序列重复个数不同所致,并发现5种等位基因,分别为86bp 2,3,4,5,6个的重复。我们用PCR扩增的基因产物带为500、410和240 bp,与Tarlow报导的其中3种一致。
  在银屑病病损中IL-1,IL-1r和IL-1ra之间的平衡有改变[5],其相互之间平衡决定炎症反应程度。本研究发现,寻常型银屑病患者A2携带率明显高于正常对照,尤其是斑块状银屑病者更高于正常对照组提示,IL-1RN等位基因2与寻常型银屑病有相关性。据此,我们推测IL-1ra基因中A2可能与IL-

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