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血管内皮细胞生长因子及其受体在肾细胞癌中的表达 |
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王忠 张元芳 刘本春 孔宪国
作者应用免疫组织化学染色技术，对血管内皮细胞生长因子（VEGF）及其受体(KDR)在肾细胞癌组织中进行了定位研究，为抗血管治疗提供一个靶子。
一、对象和方法
1.对象：1991年1月至1992年10月在我所手术并经病理证实的24例原发性肾细胞癌患者，将肿瘤标本常规石蜡包埋。病理分型：透明细胞型22例，颗粒细胞型1例，混合细胞型1例。按Robson分期：Ⅰ期13例，Ⅱ期6例，Ⅲ期3例，Ⅳ期2例。蜡块4 μm连续切片10张，HE染色1张核实诊断，余供免疫组织化学染色用。另用6例尸检的正常肾组织作对照。
2.试剂来源：VEGF单克隆抗体为Oncogene Research产品，工作浓度为1∶25。KDR多克隆抗体为Santa Cruz Biotechnology公司产品，工作浓度为1∶20。生物素标记的羊抗兔抗体，生物素标记的马抗兔抗体，及卵蛋白-生物素辣根过氧化物酶复合物（ABC）为美国Vector公司产品。3,3－二氨基联苯胺
作者单位：200040 上海医科大学泌尿外科研究所 华山医院泌尿外科
（DAB）为瑞士Fluka公司产品。
3.免疫组织化学染色：采用ABC法(生物素卵白素酶标记复合物),以特异的VEGF单抗和KDR多抗作为第一抗体，按常规法染色,阴性对照用TBS代替第一抗体。
4.结果判断标准：VEGF：微血管内皮细胞和肿瘤细胞浆内出现棕色染色为阳性，KDR：微血管内皮细胞有棕色着色为阳性。
二、结果
24例肾细胞癌有22例（96%）出现VEGF阳性染色，邻近坏死区的肿瘤组织及基质间质的血管可表现为强染色，2例阴性,对照组6例均阴性，两组间有统计学意义（四格表精确计算法P<0.001）。24例肾细胞癌21例（92%）KDR阳性染色，而对照组6例仅在肾小球区有很弱的染色，无第一抗体的对照均未染色，两组间有统计学意义(P<0.001)。
三、讨论
血管内皮细胞生长因子（VEGF/VPF）是一个多功能的细胞因子，可诱发血管形成，对肿瘤的生长起着重要的作用。VEGF选择性地作用于血管内皮细胞的两种Ⅲ型酪氨酸激酶受体flt-1和KDR，KDR是血管形成的主要调控因子［1］。Brown等用免疫组织化学和原位杂交的方法研究5例肾细胞癌，在癌细胞和小血管均有VEGF抗体染色，而正常肾组织和不加抗体的阴性对照无染色［2］。VEGF通过调节微血管的通透性，本组24例肾细胞癌，有22例VEGF染色阳性，说明有VEGF mRNA转录产生的VEGF蛋白的表达，其受体KDR有21例染色阳性，证实了该受体的存在。2例VEGF未染色和3例KDR未染色，可能与中国人肾细胞癌的个体发病特点有关，这几例患者的血管生成可能为其它血管生成因子调控。
参考文献
1 李晓明，汤钊猷，血管内皮细胞生长因子及其受体与肿瘤血管形成.国外医学肿瘤学分册，1997，24：11-13.
2 Dvorak HF,Drown F,Detmar M,et al. Vascular peameability factor/ vascular endothelial growth factor,microvascular hypermeability,and angiogenesis. Am J Pathol, 1995，146：1029-1039.
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