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放线菌酮对大鼠应激性溃疡的预防作用 |
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陈学清 潘国宗 周殿元
胃酸在应激性溃疡发病中的作用，文献报道颇不一致［1～3］。放线菌酮(Cycloheximide, CHX)是一种大蛋白分子合成抑制剂。我们发现，CHX能特异地诱导大鼠粘膜淋巴细胞凋亡，并能抑制胃泌素和组织胺刺激引起的胃酸分泌［4］。为进一步探讨胃酸在应激性溃疡发生中的作用，我们应用大鼠冷拘束应激性溃疡模型，观察了CHX对实验性应激性溃疡发生的影响。
一、材料和方法
1.试剂和仪器：放线菌酮购自德国Serva公司。奥美啦唑为阿斯特拉公司产品。硝基精氨酸(Nω-Nitro-L-Arginine，LNNA)购自美国Sigma公司。其它试剂为国产分析纯。Doppler激光血流仪(LDH-2型)为天津南开大学电子仪器厂产品。
2.应激性溃疡模型：雌性SD大鼠(220±20 g)禁食48小时(自由饮水)随机分组，每组5只。动物用乙醚麻醉后，打开腹腔，从十二指肠注入150 mmol/L NaCl 1.0 ml。结扎幽门和贲门，束缚后置于4℃冰箱。实验结束后，取出胃液，将大鼠胃沿大弯剪开，固定于4%中性多聚甲醛中，在解剖显微镜下计算损伤指数［3］。部分腺胃组织常规脱水包埋作病理组织学检查。根据需要，实验前1.0小时，从大鼠腹腔注射奥美啦唑1.0 mg/kg、LNNA 3.0 mg/kg或/和CHX。
动物分组：Ⅰ组为冷拘束+生理盐水；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别为冷拘束+CHX(剂量分别为1.0、2.0和3.0 mg/kg)；Ⅴ组为冷拘束+奥美啦唑；Ⅵ组为冷拘束+CHX(3.0 mg/kg)+LNNA。
附表 放线菌酮对冷拘束大鼠胃损伤、胃酸分泌和
胃粘膜淋巴细胞凋亡的影响(±s)
组别 鼠数 胃损伤
指数(%) 胃酸排出
量(μmol/3h) 凋亡细胞(小
体)计数(%)
Ⅰ 5 38.0±4.2
252±30
-
Ⅱ 5 30.2±1.7
212±34
14.2±2.3
Ⅲ 5 8.6±2.2**
21± 4**
41.2±2.1
Ⅳ 5 1.0±0.6**
21± 5**
59.4±6.4
Ⅴ 5 0.8±0.8**
22± 4**
-
Ⅵ 5 11.4±2.2*
45±17**
62.0±7.6
与Ⅰ组相比，* P<0.05，** P<0.01
3.活体胃小腔模型：参考文献［5］方法制备，胃粘膜面积约0.8 cm2。稳定30分钟后开始测定胃粘膜血流和胃酸分泌量，并静脉给予不同剂量的CHX。给予CHX后30分钟内为胃粘膜血流的基础值(100%)，2小时后记录为基础值%。胃粘膜血流量每次记录时间约1.5秒。
4.胃酸分泌量的测定：应激实验结束后，收集胃液，离心后用0.01 mol/L NaOH反向滴定测定胃酸，酚红为指示剂。
5.病理组织学检查：4 μm石蜡切片常规脱蜡水化，HE染色，光镜检查。淋巴细胞凋亡判断参考文献方法并做凋亡细胞(小体)计数［4］，每张切片计数50个淋巴细胞。
6.统计学处理：实验结果数据作多因素方差分析。
二、结果
1.CHX对应激性溃疡发生的保护作用：3小时应激实验结束后，Ⅲ、Ⅳ组和奥美啦唑组胃粘膜大体正常，而对照组可见胃粘膜上附有大量血痂和粘膜溃疡。Ⅱ和Ⅵ组胃粘膜损伤较对照组轻。各组的损伤指数见附表。Ⅱ～Ⅵ组的损伤指数分别为对照组的79.4%、22.6%、2.6%、2.1%和30%。
2.应激性大鼠的胃酸分泌量：结果见附表。对照组胃酸分泌量为252 μmol/3 h。CHX和奥美啦唑可明显抑制胃酸的分泌。LNNA对胃酸分泌无明显影响。
3.CHX对安静大[1] [2] 下一页
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