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BacT ALERT 3D结核分支杆菌快速培养系统在脊柱结核诊断中的应用

溶液溶解一瓶含有二性霉素B、阿洛西林、多黏菌素等组成的抗生素添加剂,在接种标本前加0.5mL的抗生素添加剂至BacT/ ALERT 3D MP 处理培养瓶中,然后每瓶接种经中和或离心沉淀后的标本0.5mL接种,培养瓶经扫描确认后,放入BacT/ALERT 3D 全自动分枝杆菌培养仪中,由仪器自动监测,仪器提示阳性后取出,阴性在42d后仪器报告阴性后取出。

  1.4 萋—尼抗酸染色镜检及常规菌种鉴定

  所有培养阳性者行抗酸染色镜检及参照《结核病诊断细菌学检验规程》分枝杆菌菌种鉴定方法[3],接种PNB和TCH培养基进行菌种鉴定。

  2 结果

  2.1 两种培养方法的比较

  43例患者BacT/ ALERT 3D法培养阳性25例,其中6例镜检后发现为杂菌污染,包括2例肉芽肿标本,4例硬化骨标本,故实际培养阳性结果为19例;罗氏培养法共培养阳性11例,无1例标本出现杂菌污染。BacT/ ALERT 3D法培养阳性率为44%,高于罗氏培养法的25%(P<0.05),BacT/ ALERT 3D法总的阳性平均报告时间为16d,最快12h,罗氏培养法平均为30d,最快出现阳性所需时间为25d,阳性结果菌种鉴定后人型结核杆菌为16例,牛型结核杆菌为3例。

  2.2 化疗前后结核分枝杆菌BacT/ ALERT 3D法培养的阳性结果比较

  10例患者入院即行CT引导下脓肿或病椎穿刺后BacT/ ALERT 3D法培养,阳性9例,化疗2周后术中取同样标本经BacT/ ALERT 3D法培养仅2例出现阳性,化疗前后结核分枝杆菌BacT/ ALERT 3D法培养阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。

  2.3 BacT/ ALERT 3D法培养同一患者不同病灶标本的阳性结果比较

  BacT/ ALERT 3D法培养43例患者结核肉芽肿标本阳性19例,脓液标本阳性10例,硬化骨标本阳性仅4例,阳性率分别为结核肉芽肿(44%)、脓液(23%)和硬化骨(9%),三者差异有统计学意义(P<0.05)。

  3 讨论

  3.1 培养方法的选择

  脊柱结核是常见的肺外结核,占全身骨关节结核的50%以上,如能早期诊断及治疗,可避免畸形和瘫痪的发生。目前我国脊柱结核的诊断大多依靠患者的病史、临床表现、影像学表现及术后组织学检查来确诊,但时常存在难以与非典型性脊柱结核、化脓性脊柱炎等疾病相鉴别的困惑。细菌培养是诊断结核分枝杆菌疾病的金标准,但传统的罗氏培养法培养结核分枝杆菌至少2~8周甚至更长的时间才能出现阳性结果[4],同时由于脊柱结核的诊治中脊柱结核在结核病的流行传播中重要性较小,培养阳性率低,再加上术前患者至少需要2周以上的抗痨,使活菌数量进一步减少,有关文献报道其培养阳性率分别为30.2%和14.5%[5-6],较长的等待时间和低的阳性率使大多数临床医生不愿进行结核分枝杆菌培养。

  BacT/ ALERT 3D 系统是利用细菌在生长过程中产生CO2的原理,通过比色计传感器和反射光连续自动监测培养瓶底部的CO2变色指示剂的颜色变化来显示培养瓶内是否有细菌生长。本研究BacT/ ALERT 3D法培养阳性率为44%,明显高于罗氏培养法的25%;阳性出现所需时间BacT/ ALERT 3D法短于罗氏培养法,高阳性率和短培养时间可能与以下三方面有关:(1)所送标本均前处理后离心取沉淀接种,提高了阳性检出率;(2)具有严密封闭性的专用培养基中有足够的营养成分供结核菌生长的需要;(3)结核杆菌最佳恒定的生长条件如温度、湿度等远比罗氏培养法优越。

  BacT/ ALERT 3D 系统在结核分支杆菌快速培养中有操作简便、全自动化、高阳性率及耗时短等优点[7-8],对脊柱结核的早期诊断有较高的临床意义,但BacT/ ALERT 3D 系统价格昂贵,液体培养基依赖进口,从而限制了在临床的推广和应用[9],如能自行研制和改进培养基、降低成本、则可在更多医院推广。

  3.2 培养物取材的时间及培养物的选择

  脊柱结核如能早诊断、早治疗,不仅可抑制病变发展、缩短疗程,减轻患者经济负担,避免或减少畸形发生,且可以保全功能,甚至可以不用手术而达到治愈的目的,但由于培养取材较困难,目前大部分研究者培养的标本是在术中取得,术前至少已抗痨2周以上。抗痨药物的使用,使得病灶中的菌量减少,活性降低,结核菌培养的阳性率较低。另有研究表明[10]有些麻醉药也能抑制试管内结核分枝杆菌的生长。国内有学者[11]认为化疗2个月内与化疗2个月

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