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泰素帝抑制体外卵巢癌细胞增殖的研究 |
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张焱 程云英
泰素帝（docetaxel）是紫杉醇的半合成衍生物，作为一种重要的新型抗肿瘤药物，对顽固性、复发性卵巢癌具有较好疗效。为了从细胞水平探讨泰素帝对卵巢癌细胞的作用机理，本研究用体外细胞增殖抑制实验——四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察泰素帝对人卵巢上皮性癌细胞株HO8910增殖的抑制作用；电子显微镜（电镜）观察药物作用后细胞形态变化，流式细胞仪（FCM）观察细胞的凋亡率及细胞周期的变化。现报道如下。
一、材料与方法
1.材料：泰素帝购于法国罗纳普朗克乐安公司，人卵巢上皮性癌细胞株HO8910由中国科学院上海细胞生物所提供，培养基RPMI1640为美国GIBCO公司产品，小牛血清为杭州四季青公司产品，胰酶为上海华美公司产品， MTT为美国Sigma公司产品，FACSCalibur型FCM为美国Becton Dickinson公司产品，H-600型透射电镜为日本日立公司产品。
2.方法：（1）细胞增殖抑制实验：根据章静波等［1］的方法,将HO8910细胞接种于96孔培养板上，设实验组与对照组，实验组加泰素帝的终浓度分别为1×10-4、5×10-4、1×10-3、5×10-3、1×10-2、5×10-2、1×10-1、5×10-1、1 mg/L，对照组加入与实验组各浓度等量的乙醇。培养48 h后用酶标仪于波长570 nm处测吸光度（A）值。抑制率（%）为（1-实验组A值/对照组A值）×100%，抑制率大于50%有统计学意义。（2）细胞凋亡观察：取对数生长期HO8910细胞，分为对照组及实验组。收集对照组及实验组（泰素帝浓度0.1 mg/L，培养24 h）细胞，沉淀物用4%戊二醛固定后，按常规方法制成厚约600 A的超薄切片，在透射电镜下观察。（3）DNA含量及细胞周期分析：分组和细胞处理同方法（2），置于37℃、5%二氧化碳培养箱中孵育，培养12、18及24 h，柠檬酸缓冲液固定，FCM行DNA含量及细胞周期分析(美国Becton Dickinson公司CELLQUEST软件)。
3.统计学方法：所有数据用±s表示，两样本均数比较用配对的t检验。
二、结果
表1 两组细胞在不同浓度泰素帝作用下的抑制率(%，±s)
组别 泰素帝（mg/L）
1 5×10-1 1×10-1 5×10-2 1×10-2 5×10-3 1×10-3 5×10-4 1×10-4
对照组 30.3±1.6
28.6±0.7
25.2±1.4
21.5±1.0
18.0±0.2
15.3±1.8
10.4±4.2
5.9±0.9
0.6±5.3
实验组 99.7±0.4* 92.3±0.5* 77.9±3.5* 67.8±9.2* 58.5±5.9* 46.2±2.3* 36.4±1.6* 19.3±2.0* 2.6±4.5
*与对照组比较，P<0.05
1.细胞增殖抑制情况：MTT比色法检测泰素帝对HO8910细胞增殖的抑制率，见表1。在1×10-4～1 mg/L浓度下，实验组对HO8910细胞有明显抑制作用，而对照组的抑制率均<40%，除1×10-4 mg/L外各浓度下，实验组与对照组相比，差异均有显著性（P<0.05）。MTT比色法还检测出泰素帝对HO8910细胞的50%抑制浓度(IC50)为6.31×10-3 mg/L，95%可信区间为6.22×10-3～6.40×10-3 mg/L。
2.细胞凋亡情况：透射电镜观察，对照组细胞较大，细胞浆透亮，核膜完整，染色质密度正常，细胞器清晰，可见较多微绒毛，符合腺癌特征。实验组的细胞核染色[1] [2] 下一页
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